基于自组装核酸探针信号放大技术检测DNMT1的活性和水平
发布时间：2021-08-25 18:18
目的DNA 甲基转移酶 1（DNA（cytosine-5）methyltransferase 1,DNMT1）是肺癌等恶性肿瘤的重要生物标志之一。检测其在生物样本中的表达活性和水平对癌症的早期诊断和预后有很重要的意义。本研究拟采用磁性纳米颗粒作为固相载体,采用自组装核酸探针信号放大技术建立检测DNMT1表达活性和水平的新方法,为临床样本中DNMT1活性和水平的检测提供新选择,为肿瘤的早期诊断提供新思路。方法1.自组装核酸探针信号放大技术检测DNMT1活性方法的建立首先,利用链霉亲和素和生物素的高亲和力将生物素化的DNMT1作用序列（Biotin-S1’-S2’）固定到链霉亲和素磁珠上。其次,利用自组装的方法构建荧光信号放大探针聚四甲基罗丹明（聚TAMRA）。之后,将构建好的聚TAMRA通过DNA杂交作用连接到Biotin-S1’-S2’上,利用聚TAMRA上含有多个荧光染料TAMRA实现荧光检测信号的放大。最后加入目标物DNMT1和限制性内切酶BssHⅡ。当DNMT1存在时,可将半甲基化的Biotin-S1’-S2’完全甲基化,使其不被BssHⅡ识别和切断,荧光信号较强;当DNMT1不...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．１自组装核酸探针信号放大技术检测ＤＮＭＴ１活性的原理图??（２）检测ＤＮＭＴ１活性的技术路线??＇
图２．３信号放大探针聚ＴＡＭＲＡ形成原理??
ＡＭ；复溶于杂交缓冲液中在荧光光谱仪上检测体系的荧光强??度，根据荧光强度和ＤＮＭＴ１的浓度之间的线性关系，实现ＤＮＭＴ１表达水平的??定量检测。??〇?〇??＿?Ｍ?Ｙ?ＡＡ?Ｙ?ｗｍ?ｘ．＞??Ａ—八—Ｍ?一汽一汽?＾??｜）１??＾＿＿＾?汽??ＷｋｖＨｅｎｉｔｔｌＭｎｍ）??Ｙ?ＭｃＡｂＤＮＭＴ１?Ｙ羊抗兔丨ｇＧ－Ｂｉｏ?■链霉亲和素?羧基磁珠??：■＇?ＰｃＡｂＤＮＭＴ１?傷待测样品中的ＤＮＭＴ１?／Ｍｗａ和ｗｓｏｃ＾＾ｑｉｗｗｖ?Ｂｉｏｔｉｎ－聚ＦＡＭ??图２．４自组装核酸探针信号放大技术检测ＤＮＭＴ１水平的原理图??（２）检测ＤＮＭＴ１水平的技术路线??检测ＤＮＭＴ１表达水平的技术路线如图２．５所示。用ＥＤＣ／ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ活化法??将羧基磁珠和ＭｃＡｂＤＮＭＴｌ进行偶联，得到免疫磁珠，用于特异性捕获ＤＮＭＴ１。??捕获目标物后的免疫磁珠再与ＰｃＡｂＤＮＭＴＫ羊抗兔ＩｇＧ－Ｂｉｏ结合构成双抗夹心免??疫磁珠。??将单链ＤＮＡ?Ｓ３－Ｂｉｏｔｉｎ和Ｓ４＇ＦＡＭ进行杂交，得到长短不一的含有多个??ＦＡＭ的Ｂｉｏｔｉｎ－聚ＦＡＭ。用桥联介质链霉亲和素将双抗夹心免疫磁珠和聚ＦＡＭ??连接起来，通过检测ＦＡＭ的荧光强度定量ＤＮＭＴ１的表达水平。用单因素实验??对检测条件进行优化后，建立标准曲线，对所建立方法的检出限、精密度、加标??回收率和特异性进行考察。??１５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA甲基转移酶1与维甲酸受体β在子宫颈癌变中的表达及相互关系[J]. 战翠新. 中国药物与临床. 2019(16)
[2]Development of a rapid and sensitivity magnetic chemiluminescence immunoassay for DNA methyltransferase 1 in human serum[J]. Sitian He,Leiliang He,Beibei Liu,Songcheng Yu,Li’e Liu,Yongmei Tian,Jia Wang,Lihua Ding,Yilin Wang,Lingbo Qu,Fei Yu,Yongjun Wu. Chinese Chemical Letters. 2019(05)
[3]DNA甲基转移酶在胃癌中的表达及其意义[J]. 王震凯,杨晓倩,叶雅沁,韦志琴,顾燕,范青青,刘丹,汪芳裕. 胃肠病学. 2019(02)
[4]DNA甲基转移酶与肿瘤关系的研究进展[J]. 肖枭,王艳林,黄利鸣. 生命科学. 2019(01)
[5]DNA甲基化的分子机制及其研究进展[J]. 宋乔,高世超,王培昌. 基因组学与应用生物学. 2019(07)
[6]DNMT1在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响[J]. 李洁,郭艳平,武磊,刘艳丽,邹余粮. 现代肿瘤医学. 2018(24)
[7]宫颈癌中DNMT1的高表达与其不良生存结局的相关性[J]. 罗舒,陈非,郭黔,文庆莲. 实用医学杂志. 2018(17)
[8]GLI1转录因子突变及异构体在恶性肿瘤的研究进展[J]. 刘宇轩,刘陶文. 华夏医学. 2018(02)
[9]人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测[J]. 黄滔,曹玉祥,张志坚,周兴路,魏慧君,吴志浩. 皖南医学院学报. 2018(01)
[10]宫颈病变组织中DNMT1和MeCP2异常表达与细胞生物学特征的相关性研究[J]. 林薇,马莎. 海南医学院学报. 2016(19)
硕士论文
[1]电致化学发光法检测人类甲基转移酶（DNMT1）活性的研究[D]. 郭智慧.南京师范大学 2017
本文编号：3362616
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．１自组装核酸探针信号放大技术检测ＤＮＭＴ１活性的原理图??（２）检测ＤＮＭＴ１活性的技术路线??＇
图２．３信号放大探针聚ＴＡＭＲＡ形成原理??
ＡＭ；复溶于杂交缓冲液中在荧光光谱仪上检测体系的荧光强??度，根据荧光强度和ＤＮＭＴ１的浓度之间的线性关系，实现ＤＮＭＴ１表达水平的??定量检测。??〇?〇??＿?Ｍ?Ｙ?ＡＡ?Ｙ?ｗｍ?ｘ．＞??Ａ—八—Ｍ?一汽一汽?＾??｜）１??＾＿＿＾?汽??ＷｋｖＨｅｎｉｔｔｌＭｎｍ）??Ｙ?ＭｃＡｂＤＮＭＴ１?Ｙ羊抗兔丨ｇＧ－Ｂｉｏ?■链霉亲和素?羧基磁珠??：■＇?ＰｃＡｂＤＮＭＴ１?傷待测样品中的ＤＮＭＴ１?／Ｍｗａ和ｗｓｏｃ＾＾ｑｉｗｗｖ?Ｂｉｏｔｉｎ－聚ＦＡＭ??图２．４自组装核酸探针信号放大技术检测ＤＮＭＴ１水平的原理图??（２）检测ＤＮＭＴ１水平的技术路线??检测ＤＮＭＴ１表达水平的技术路线如图２．５所示。用ＥＤＣ／ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ活化法??将羧基磁珠和ＭｃＡｂＤＮＭＴｌ进行偶联，得到免疫磁珠，用于特异性捕获ＤＮＭＴ１。??捕获目标物后的免疫磁珠再与ＰｃＡｂＤＮＭＴＫ羊抗兔ＩｇＧ－Ｂｉｏ结合构成双抗夹心免??疫磁珠。??将单链ＤＮＡ?Ｓ３－Ｂｉｏｔｉｎ和Ｓ４＇ＦＡＭ进行杂交，得到长短不一的含有多个??ＦＡＭ的Ｂｉｏｔｉｎ－聚ＦＡＭ。用桥联介质链霉亲和素将双抗夹心免疫磁珠和聚ＦＡＭ??连接起来，通过检测ＦＡＭ的荧光强度定量ＤＮＭＴ１的表达水平。用单因素实验??对检测条件进行优化后，建立标准曲线，对所建立方法的检出限、精密度、加标??回收率和特异性进行考察。??１５??
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA甲基转移酶1与维甲酸受体β在子宫颈癌变中的表达及相互关系[J]. 战翠新. 中国药物与临床. 2019(16)
[2]Development of a rapid and sensitivity magnetic chemiluminescence immunoassay for DNA methyltransferase 1 in human serum[J]. Sitian He,Leiliang He,Beibei Liu,Songcheng Yu,Li’e Liu,Yongmei Tian,Jia Wang,Lihua Ding,Yilin Wang,Lingbo Qu,Fei Yu,Yongjun Wu. Chinese Chemical Letters. 2019(05)
[3]DNA甲基转移酶在胃癌中的表达及其意义[J]. 王震凯,杨晓倩,叶雅沁,韦志琴,顾燕,范青青,刘丹,汪芳裕. 胃肠病学. 2019(02)
[4]DNA甲基转移酶与肿瘤关系的研究进展[J]. 肖枭,王艳林,黄利鸣. 生命科学. 2019(01)
[5]DNA甲基化的分子机制及其研究进展[J]. 宋乔,高世超,王培昌. 基因组学与应用生物学. 2019(07)
[6]DNMT1在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响[J]. 李洁,郭艳平,武磊,刘艳丽,邹余粮. 现代肿瘤医学. 2018(24)
[7]宫颈癌中DNMT1的高表达与其不良生存结局的相关性[J]. 罗舒,陈非,郭黔,文庆莲. 实用医学杂志. 2018(17)
[8]GLI1转录因子突变及异构体在恶性肿瘤的研究进展[J]. 刘宇轩,刘陶文. 华夏医学. 2018(02)
[9]人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测[J]. 黄滔,曹玉祥,张志坚,周兴路,魏慧君,吴志浩. 皖南医学院学报. 2018(01)
[10]宫颈病变组织中DNMT1和MeCP2异常表达与细胞生物学特征的相关性研究[J]. 林薇,马莎. 海南医学院学报. 2016(19)
硕士论文
[1]电致化学发光法检测人类甲基转移酶（DNMT1）活性的研究[D]. 郭智慧.南京师范大学 2017
本文编号：3362616
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