人脐带间充质干细胞分泌的微囊通过AKT/mTOR信号通路诱导膀胱肿瘤自噬性增强的研究

发布时间：2021-08-28 01:11

　　目的:前期体内、体外研究均表明,来源于脐带间充质干细胞的微囊（h WJMSCs-MVs）可以有效的抑制膀胱肿瘤细胞（T24细胞）生长,但具体机制仍未明确。本实验通过应用人脐带间充质干细胞微囊作用于膀胱肿瘤细胞后观察膀胱肿瘤细胞内自噬水平的变化,研究微囊对膀胱肿瘤细胞自噬的影响及自噬体与肿瘤细胞凋亡的关系,并探讨其中可能影响到的信号通路。方法:（1）细胞培养:通过获得参与者知情同意后,将获取的新鲜脐带在无菌条件下进行贴壁原代培养,在标准的DMEM培养基中培养细胞待融合到80-90%时,采用1:2的比例对原代脐带间充质干细胞进行传代。细胞生长状态稳定后,取第3-6代进行实验。（2）微囊的提取及鉴定:取3-6代生长旺盛且细胞形态稳定的h WJMSCs,采用高速离心法提取微囊后,采用流式细胞仪对分离的微囊（MVs）进行鉴定,而后采用Bradford法对收集的微囊进行蛋白定量,并应用透射电镜h WJMSC-MVs观察微囊的大小及形态。（3）hWJMSC-MVs对肿瘤细胞的影响:应用h WJMSC-MVs处理膀胱肿瘤细胞后,透射电镜观察细胞内自噬体数量变化,Western Blot检测自噬体相关蛋... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：37 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 材料与试剂
    1.1 实验材料
    1.2 细胞培养试剂
    1.3 主要抗体
    1.4 实验耗材和仪器
2 实验方法与步骤
    2.1人脐带间充质干细胞的原代培养及鉴定分析
    2.2 T24细胞复苏
    2.3 细胞传代培养
    2.4 细胞冻存
    2.5 hWJMSC-MVs的制备
    2.6 hWJMSC-MVs的电镜鉴定
    2.7 膀胱肿瘤细胞自噬体变化的透视电镜检测
    2.8 蛋白印迹法（Western blot）检测膀胱癌细胞株蛋白表达水平
        2.8.1 蛋白抽提及蛋白浓度测定
        2.8.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
        2.8.3 免疫印迹
    2.9 膀胱肿瘤细胞凋亡检测
    2.10 统计学处理
3 结果
    3.1 hWJMSC-MVs分离及鉴定
    3.2 hWJMSC-MVs明显诱导T24细胞自噬体生成
    3.3 hWJMSC-MVs通过AKT/m TOR诱导T24细胞自噬及相关信号通路的变化
    3.4 3-MA抑制T24细胞自噬后Western blot检测再次监测MVs作用的膀胱癌细胞内自噬相关基因的表达
    3.5 3-MA抑制T24细胞的自噬的电镜变化
    3.6 3-MA抑制T24细胞的自噬， hWJMSC-MVs对T24细胞凋亡的变化
4 讨论
5 结论
References
自噬介导的肿瘤细胞的生存和死亡（综述）
    References
攻读学位期间的研究成果
致谢



本文编号：3367477