DRAK1通过TGF-β/Smad信号通路促进非小细胞肺癌迁移及侵袭
发布时间：2021-08-28 02:57
目的:DRAK1即丝/苏氨酸激酶17A（STK17A）,是一种普遍表达的激酶,最初被认定为是细胞凋亡的调节因子。其在恶性肿瘤中的表达及生物学功能是局限的,并且其在非小细胞肺癌中的角色仍有待证实。本文旨在探究DRAK1在非小细胞肺癌中的表达,生物学功能并初步探索相关的分子机制。研究方法:1.采用免疫组织化学染色的实验方法检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织和周围正常组织内DRAK1的表达水平和分布情况,并对其与临床病理因素及临床预后所存在的关联进行分析。2.采用免疫印迹实验方法检测DRAK1在NSCLC新鲜组织及配对正常癌旁组织中的表达。3.采用免疫印迹及免疫荧光的实验方法研究肺癌细胞系中DRAK1的表达及定位情况。4.通过细胞划痕实验和基质胶侵袭实验研究DRAK1对肺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。5.通过细胞系转染实验在A549细胞系中上调DRAK1的表达,在LK2细胞系中下调DRAK1的表达研究细胞侵袭及EMT相关蛋白的变化情况。6.采用免疫荧光及免疫沉共沉淀的实验方法确定与DRAK1存在共定位并结合的蛋白。结果:1.DRAK1在NSCLC胞浆中高表达,在其他癌旁正常肺组织内低表达。胞浆...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：35 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DRAK1在正常组织及NSCLC中的表达及定位A.DRAK1在正常支气管上皮组织中弱表达B.DRAK1在正常腺体中弱表达
中国医科大学硕士学位论文8表1.104例非小细胞肺癌中DRAK1的过表达与临床病理参数的关联参数病例数DRAK1浆表达阴性阳性p*X2总数年龄1045351<553516190.2900.581≥55693732性别男6836320.3080.364女361719组织学类型鳞癌4527180.0792.593腺癌592633分级高-中分化7542332.7320.076低分化291118TNM分期Ⅰ+Ⅱ5839190.00013.907Ⅲ+Ⅳ461432淋巴结转移有4518270.0393.814无593524图1.2DRAK1阴性患者与DRAK1阳性患者的生存分析生存分析显示DRAK1阳性表达的患者中位生存时间明显短于DRAK1阴性表达的患者,差异具有统计学意义(*P<0.05)。
中国医科大学硕士学位论文9图1.3DRAK1在非小细胞肺癌新鲜组织对中的表达情况免疫印迹结果显示，DRAK1在非小细胞肺癌组织中表达显著高于癌旁正常肺组织(**P<0.01)3.2DRAK1促进NSCLC细胞的迁移、侵袭并上调EMT相关蛋白的表达为了探讨DRAK1在肺癌细胞中的生物学功能，我们首先检测了在正常支气管上皮细胞HBE和A549、H1299、PC9、H460、H661、LK2和SK在内的七种肺癌细胞系中DRAK1的表达，WB结果显示在LK2、PC9、A549、H460、H661肺癌细胞系中DRAK1的表达显著高于HBE、H1299、SK细胞系(P<0.05)(如图2.1A)。免疫荧光实验结果显示DRAK1主要定位在胞质中(如图2.1B)。我们选择肺腺癌细胞系A549和肺鳞癌细胞系LK2进行接下来的实验，在A549细胞系中转染DRAK1cDNA上调DRAK1表达水平，LK2细胞系中转染siRNA下调DRAK1表达水平。转染效率应用WB在A549、LK2细胞系中得到验证(如图2.2A)。通过细胞划痕实验研究肺癌细胞迁移能力，发现相对于对照组细胞，DRAK1上调促进A549细胞迁移(P<0.05)，而DRAK1的下调抑制LK2细胞迁移(P<0.05)(如图2.2B)。基质胶侵袭实验分析肺癌细胞侵袭能力，结果显示与对照细胞相比，DRAK1上调促进A549细胞侵袭(P<0.05),DRAK1的下调抑制LK2细胞侵袭(P<0.05)(如图2.2C)。EMT对癌细胞转移有着极其重要的影响。随着DRAK1的过表达，N-cadherin、snail、slug的表达水平升高而E-cadherin降低，侵袭相关蛋白matrixmetalloproteinase(MMP)9及(MMP)7表达水平升高,而DRAK1敲低出现相反的结果(如图2.2D)。
本文编号：3367648
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：35 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DRAK1在正常组织及NSCLC中的表达及定位A.DRAK1在正常支气管上皮组织中弱表达B.DRAK1在正常腺体中弱表达
中国医科大学硕士学位论文8表1.104例非小细胞肺癌中DRAK1的过表达与临床病理参数的关联参数病例数DRAK1浆表达阴性阳性p*X2总数年龄1045351<553516190.2900.581≥55693732性别男6836320.3080.364女361719组织学类型鳞癌4527180.0792.593腺癌592633分级高-中分化7542332.7320.076低分化291118TNM分期Ⅰ+Ⅱ5839190.00013.907Ⅲ+Ⅳ461432淋巴结转移有4518270.0393.814无593524图1.2DRAK1阴性患者与DRAK1阳性患者的生存分析生存分析显示DRAK1阳性表达的患者中位生存时间明显短于DRAK1阴性表达的患者,差异具有统计学意义(*P<0.05)。
中国医科大学硕士学位论文9图1.3DRAK1在非小细胞肺癌新鲜组织对中的表达情况免疫印迹结果显示，DRAK1在非小细胞肺癌组织中表达显著高于癌旁正常肺组织(**P<0.01)3.2DRAK1促进NSCLC细胞的迁移、侵袭并上调EMT相关蛋白的表达为了探讨DRAK1在肺癌细胞中的生物学功能，我们首先检测了在正常支气管上皮细胞HBE和A549、H1299、PC9、H460、H661、LK2和SK在内的七种肺癌细胞系中DRAK1的表达，WB结果显示在LK2、PC9、A549、H460、H661肺癌细胞系中DRAK1的表达显著高于HBE、H1299、SK细胞系(P<0.05)(如图2.1A)。免疫荧光实验结果显示DRAK1主要定位在胞质中(如图2.1B)。我们选择肺腺癌细胞系A549和肺鳞癌细胞系LK2进行接下来的实验，在A549细胞系中转染DRAK1cDNA上调DRAK1表达水平，LK2细胞系中转染siRNA下调DRAK1表达水平。转染效率应用WB在A549、LK2细胞系中得到验证(如图2.2A)。通过细胞划痕实验研究肺癌细胞迁移能力，发现相对于对照组细胞，DRAK1上调促进A549细胞迁移(P<0.05)，而DRAK1的下调抑制LK2细胞迁移(P<0.05)(如图2.2B)。基质胶侵袭实验分析肺癌细胞侵袭能力，结果显示与对照细胞相比，DRAK1上调促进A549细胞侵袭(P<0.05),DRAK1的下调抑制LK2细胞侵袭(P<0.05)(如图2.2C)。EMT对癌细胞转移有着极其重要的影响。随着DRAK1的过表达，N-cadherin、snail、slug的表达水平升高而E-cadherin降低，侵袭相关蛋白matrixmetalloproteinase(MMP)9及(MMP)7表达水平升高,而DRAK1敲低出现相反的结果(如图2.2D)。
本文编号：3367648
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