PARP1负性调控MT1M在卵巢癌转移中的作用及机制研究

发布时间：2021-08-30 14:44

　　研究背景:卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一,其发病率在我国位居第三位仅次于宫颈癌和宫体癌,严重影响人类健康。近年来,ADP核糖聚合酶（Poly ADP-ribose Polymerase,PARP）抑制剂在卵巢癌的治疗中取得显著成效,开启了小分子抑制剂靶向治疗卵巢癌的大门。目前,PARP抑制剂主要被批准用于BRCA（Breast cancer）突变的卵巢癌患者。然而,随着临床试验数据的累积,研究者发现不论患者是否存在BRCA突变,使用PARP抑制剂Niraparib Rucaparib治疗的卵巢癌患者均能获益,显著改善了患者的无疾病生存期。因此,如何从PARP1（Poly ADP-ribose Polymerase 1）的生物学功能出发理解临床上这一现象成为该领域的研究热点。随着PARP1研究的深入关于它的其他生物学功能也开始受到关注。近年来的研究发现PARP1可以通过激活转录因子、抑制转录因子活性的方式或直接作为转录因子调控基因表达,从而调控肿瘤细胞的多种生物学功能。本研究通过分析TCGA数据库（The cancer genome atlas）发现PARP1 m RNA高度表达... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：157 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
缩略词表
绪论
1 第一部分PARP1 抑制MT1M转录促进卵巢癌转移的作用研究
    1.1 引言
    1.2 实验材料与仪器
        1.2.1 细胞株
        1.2.2 感受态细菌
        1.2.3 质粒
        1.2.4 药物与主要试剂
        1.2.5 实验仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 细胞培养
        1.3.2 siRNA转染
        1.3.3 质粒扩增
        1.3.4 质粒转染
        1.3.5 Western blotting法检测蛋白含量
        1.3.6 蛋白质免疫印迹实验(Western blotting)
        1.3.7 q RT-PCR检测目的基因m RNA水平
        1.3.8 Elisa检测
        1.3.9 SRB实验检测细胞增殖
        1.3.10 划痕愈合实验
        1.3.11 Transwell小室迁移实验
        1.3.12 条件培养基制备
        1.3.13 数据分析
    1.4 实验结果
        1.4.1 PARP1 调控的潜在靶基因MT1M
        1.4.2 卵巢癌基因芯片数据
        1.4.3 PARP1 负性调控MT1M的表达
            1.4.3.1 敲除PARP1对MT1M转录表达与蛋白表达的影响
            1.4.3.2 过表达PARP1对MT1M转录表达与蛋白表达的影响
        1.4.4 敲除PARP1对MT1M分泌的影响
        1.4.5 PARP2和PARP3对MT1M表达的影响
        1.4.6 MT1M表达对卵巢细胞增殖的影响
        1.4.7 MT1M的表达对卵巢细胞迁移影响
            1.4.7.1 MT1M高度表达抑制卵巢细胞迁移
            1.4.7.2 MT1M的低表达促进卵巢细胞迁移
        1.4.8 分泌的MT1M抑制卵巢细胞迁移
        1.4.9 PARP1的表达对卵巢细胞迁移的影响
            1.4.9.1 高度表达PARP1促进卵巢细胞迁移
            1.4.9.2 敲除PARP1抑制卵巢细胞迁移
    1.5 讨论
2 第二部分PARP1 抑制卵巢癌MT1M转录的分子机制研究
    2.1 引言
    2.2 实验材料与仪器
        2.2.1 细胞株
        2.2.2 药物与主要试剂
        2.2.3 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 siRNA转染
        2.3.3 质粒扩增
        2.3.4 质粒转染
        2.3.5 Western blotting法检测蛋白含量以Western blotting方法
        2.3.6 q RT-PCR检测目的基因m RNA水平
        2.3.7 免疫共沉淀实验
        2.3.8 PAR修饰实验
        2.3.9 荧光素酶报告基因法(Dual-Luciferase reporter assay)
        2.3.10 荧光素酶报告基因信号测定
        2.3.11 数据分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 PARP1 通过FOXP3 调控MT1M的转录表达
        2.4.2 FOXP3 调控MT1M的转录表达
        2.4.3 PARP1与FOXP3 相互结合
        2.4.4 FOXP3发生核糖基化修饰
        2.4.5 PARP1 抑制由FOXP3 介导的MT1M的转录表达
        2.4.6 敲除PARP1 增强卵巢癌细胞FOXP3 的表达
        2.4.7 PARP抑制剂增强卵巢癌细胞FOXP3 的表达
    2.5 讨论
3 第三部分PARP抑制剂促进MT1M表达抗卵巢癌转移的作用
    3.1 引言
    3.2 实验材料与仪器
        3.2.1 细胞株
        3.2.2 实验动物
        3.2.3 药物与主要试剂
        3.2.4 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养
        3.3.2 Western blotting法检测蛋白含量以Western blotting方法
        3.3.3 q RT-PCR检测目的基因m RNA水平
        3.3.4 SRB实验检测细胞增殖
        3.3.5 Elisa实验法
        3.3.6 划痕愈合实验
        3.3.7 Transwell小室实验
        3.3.8 苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)染色:H&E染色
        3.3.9 免疫组化染色:
        3.3.10 包装慢病毒与感染慢病毒
        3.3.11 动物实验
        3.3.12 数据分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 PARP抑制剂促进MT1M的转录表达与分泌
        3.4.2 PARP抑制剂抑制卵巢癌细胞的迁移
        3.4.3 MT1M在 PARP抑制剂抑制卵巢癌细胞的迁移中的作用
        3.4.4 Olaparib抑制尾静脉接种卵巢癌细胞CaOV3 的肺转移
        3.4.5 Olaparib抑制原代卵巢癌HO-8910PM PDX的动物模型的肺转移
    3.5 讨论
总结与展望
参考文献
附表
综述 PARP1的其他生物学功能:DNA修复之外
    参考文献
作者简历在学期间所取得的科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM的建立及其生物学特性[J]. 许沈华,钱丽娟,牟瀚舟,倪型灏,朱赤红,张谷,戴惠芳,高永良.  中华病理学杂志. 1998(06)
[2]高转移人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及其生物学特性[J]. 许沈华,牟瀚舟,钱丽娟,孙永正,朱赤红,黄晓曙,高永良,戴珊星.  中华病理学杂志. 1996(01)



本文编号：3372973