RGD修饰的腺病毒介导ING4或/和P53基因表达对人肺腺癌细胞的体内外生长抑制作用

发布时间：2021-09-01 09:36

　　目的:在本室已构建Ad.RGD空载体和Ad.RGD-ING4重组腺病毒的基础上,再构建Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53单双基因重组腺病毒,研究其对人肺腺癌细胞（A549）的体内外抑制效应及潜在分子机制。方法:PCR克隆获得P53目的基因,在本室已成功构建pAdTrack-CMV-PolyApromoter、pAdTrack-CMV-ING4-PolyA-promoter转移质粒的基础上,在多克隆酶切位点NotⅠ和XhoⅠ之间插入P53目的片段,构建pAdTrack-CMV-PolyApromoter-P53和pAdTrack-CMV-ING4-PolyA-promoter-P53重组转移质粒,再与RGD-4C修饰的腺病毒骨架质粒pAdeasy-1.RGD同源重组,经QBI-293A细胞包装、扩增和效价检测后获得高滴度重组腺病毒Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53。本项研究共分5组:PBS组、Ad.RGD空载对照组、Ad.RGD-ING4和Ad.RGD-P53单基因组、Ad.RGD-ING4-P53双基因组。将上述各组重组腺病毒分别感染A549肺癌细胞... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
    参考文献
第一部分 ING4或/和P53单双基因重组腺病毒的构建
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 实验结果
        2.1 P53基因克隆和单双基因重组转移质粒的构建和鉴定
        2.2 RGD修饰的单双基因同源重组腺病毒质粒的构建和鉴定
        2.3 各组重组腺病毒在QBI-293A细胞中的包装
        2.4 各组重组腺病毒的效价检测
        2.5 RT-PCR法鉴定ING4或/和P53单双基因重组腺病毒的构建
        2.6 Western Blot法鉴定ING4或/和P53基因在QBI-293A细胞中的蛋白表达
    3 讨论
    参考文献
第二部分 腺病毒介导ING4或/和P53基因表达对人肺腺癌细胞( A549)抑制作用的体外试验研究
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2.实验结果
        2.1 荧光显微镜观察各组重组腺病毒感染A549肺癌细胞后细胞内GFP表达
        2.2 流式细胞仪检测各组重组腺病毒对A549肺癌细胞的感染效率
        2.3 Western blot法鉴定ING4或/和P53基因在A549肺癌细胞中的蛋白表达
        2.4 MTT法检测ING4或/和P53基因表达对A549肺癌细胞的生长抑制作用
        2.5 流式细胞仪双染法检测ING4或/和P53基因表达对A549肺癌细胞凋亡的影响
        2.6 Real time-PCR检测ING4或/和P53基因表达对A549肺癌细胞内Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA表达水平的影响
        2.7 Western blot法检测ING4或/和P53基因表达对A549肺癌细胞内Bax、Bad、Bcl-xl蛋白表达水平的影响
        2.8 流式细胞仪单染法检测ING4或/和P53基因表达对A549肺癌细胞周期的影响
        2.9 Real time-PCR检测ING4或/和P53基因表达对A549肺癌细胞内P21和Cyclin -E mRNA表达水平的影响
        2.10划痕实验鉴定ING4或/和P53基因表达对人肺腺癌细胞迁移能力的影响
        2.11 Transwell法检测ING4或/和P53基因表达对人肺癌细胞侵袭能力的影响
        2.12 Real time-PCR检测ING4或/和P53基因表达对A549肺癌细胞内MMP-2 和MMP-9 mRNA表达水平的影响
    3.讨论
    参考文献
第三部分 腺病毒介导ING4或/和P53基因表达对裸鼠人肺腺癌移植瘤生长抑制效应的体内试验研究
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 裸鼠人肺腺癌移植瘤模型的建立及成瘤率
        2.2 裸鼠体内药物实验安全性观察
        2.3 各组重组腺病毒对A549裸鼠人肺腺癌移植瘤的体内抗肿瘤效应
        2.4 免疫组化检测ING4或/和P53基因表达在裸鼠体内抗肿瘤效应的分子机制
    3 讨论
    参考文献
综述：ING4与P53的结合对肿瘤的影响
    参考文献
攻读学位期间本人公开出版或发表的论著、论文
本论文受下列课题资助
缩略词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]RGD分子影像在肺癌的研究现状与进展[J]. 岳宁,袁双虎,杨国仁.  中国肺癌杂志. 2014(12)
[2]Ad.RGD-ING4-PTEN对MEG01人白血病细胞的抑制作用[J]. 黄晨,王家融,杨吉成,盛伟华,缪竞诚.  中国生物工程杂志. 2014(03)
[3]肺癌相关抑癌基因的研究进展[J]. 马变颖,王梓,张彬,朱敏,刘静.  生命科学研究. 2014(01)
[4]ING4及IL-24双基因共表达腺病毒载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用研究[J]. 王家融,韩亚丽,缪竞诚,盛伟华,杨吉成.  北华大学学报(自然科学版). 2013(03)
[5]ING4基因抗肿瘤作用的研究进展[J]. 陈斌,邓跃飞.  中国微侵袭神经外科杂志. 2008(03)
[6]p53基因在肺癌研究中的进展[J]. 张丽华,侯振江.  临床肺科杂志. 2006(01)
[7]中国12市县1993年～1997年肿瘤发病和死亡登记资料统计分析[J]. 李连弟,饶克勤,张思维,鲁凤珠,邹小农.  中国肿瘤. 2002(09)
[8]肺癌发病趋势及分析[J]. 林小萍,王庆生,刘新民.  天津医科大学学报. 2000(02)

博士论文
[1]腺病毒介导的ING4和IL-24共表达对肝癌的抑瘤增效和化疗增敏效应及分子机制[D]. 谢宇锋.苏州大学 2009



本文编号：3376747