肿瘤PIK3CA突变的富集检测新方法研究

发布时间：2021-09-02 10:55

　　分子靶向治疗是一种高效低毒的肿瘤治疗方法,可显著改善肿瘤患者的存活率和生存期。然而,其药物疗效因肿瘤个体差异而不同,发生耐药性的患者将无法从靶向药物中获益。PIK3CA在多种人类肿瘤中具有较高的突变率,携带PIK3CA突变的患者会对抗EGFR或抗HER2靶向药物耐药,而对P13K抑制剂敏感。因此,PIK3CA突变检测成为实现肿瘤个体化治疗的重要预测因子。肿瘤基因突变多为发生在实体瘤中的体细胞突变,突变型DNA往往混杂在大量的野生型基因组背景中,给肿瘤基因突变检测带来了挑战。因此,探索肿瘤稀有突变富集检测技术,提高检测方法选择性具有重要意义。本论文以PIK3CA突变检测为研究对象,以提高突变检测选择性为研究目标,结合多色探针熔解曲线技术（Multicolor melting curve analysis,MMCA）和锁核酸（Lockednucleic acid,LNA）修饰技术,探索稀有突变富集检测新方法,建立并比较了两个PIK3CA突变检测体系。第一个体系,在MMCA技术的基础上,融入LNA修饰技术,同时探针采用looping out设计,以提高探针对错配碱基的敏感性,从而提高体系检测... 

【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１?ＥｒｂＢ家族及其下游信号通路＾??Ｆｉｇ．１－１?ＥｒｂＢ?ｆａｍｉｌｙ?ａｎｄ?ｉｔｓ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙｓ??

结构域ＡＢＤ?（ａｄａｐｔｏｒ－ｂｉｎｄｉｎｇ?ｄｏｍａｉｎ），可与ｐ８５调节亚基结合；Ｒａｓ结合结构域??ＲＢＤ（Ｒａｓ－ｂｉｎｄｉｎｇ?ｄｏｍａｉｎ）；?Ｃ２结构域，与细胞膜结合相关；螺旋结构域（ｈｅｌｉｃａｌ??ｄｏｍａｉｎ）和激酶结构域（ｋｉｎａｓｅ?ｄｏｍａｉｎ）（如图１．３）。尸ＺＯＣ４突变主要发生在外??显子９上的螺旋结构域和外显子２０上的激酶结构域上，提示这种非随机性的高??频突变与ＰＩ３Ｋ酶活性的相关性［１３］。其中外显子９的Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ以及外显子??２０的Ｈ１０４７Ｒ突变发生频率最高，被称为热点突变（Ｈｏｔｓｐｏｔ?Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ），这三??种突变类型占据了所有幻Ｇ４基因突变的８０％左右。已有大量研究表明

?ｐａｔｈｗａｙｓ??ｒｅｓｐｏｎｓｅ?ｐａｔｈｗａｙｓ??图１－２ＰＩ３Ｋ主要催化机制［ｕ］??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｍａｉｎ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｃａｔａｌｙｓｅｄ?ｂｙ?ＰＩ３Ｋ??１．３ｉＹＴＯＣ４基因突变及其分子生物学意义??／＞／幻Ｃ４基因编码ＩＡ类ＰＩ３Ｋ的ｐｌｌＯａ催化亚基，由Ｖｏｌｉｎｉａ在１９９４年利用??原位杂交技术发现［１２］，该基因位于３号染色体，全长３４?ｋｂ，包含２０个外显子，??可编码１０６８种氨基酸。研宄表明，ｐｌｌＯｃｔ蛋白包括５个结构域，Ｎ端受体结合??结构域ＡＢＤ?（ａｄａｐｔｏｒ－ｂｉｎｄｉｎｇ?ｄｏｍａｉｎ），可与ｐ８５调节亚基结合；Ｒａｓ结合结构域??ＲＢＤ（Ｒａｓ－ｂｉｎｄｉｎｇ?ｄｏｍａｉｎ）；?Ｃ２结构域，与细胞膜结合相关；螺旋结构域（ｈｅｌｉｃａｌ??ｄｏｍａｉｎ）和激酶结构域（ｋｉｎａｓｅ?ｄｏｍａｉｎ）（如图１．３）。尸ＺＯＣ４突变主要发生在外??显子９上的螺旋结构域和外显子２０上的激酶结构域上，提示这种非随机性的高??频突变与ＰＩ３Ｋ酶活性的相关性［１３］。其中外显子９的Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ以及外显子??２０的Ｈ１０４７Ｒ突变发生频率最高，被称为热点突变（Ｈｏｔｓｐｏｔ?Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ），这三??种突变类型占据了所有幻Ｇ４基因突变的８０％左右。已有大量研究表明

【参考文献】：
期刊论文
[1]PIK3CA基因突变在结直肠癌中的研究进展[J]. 王丽丽,楚慧丽,毕经旺.  现代肿瘤医学. 2013(11)
[2]肿瘤基因检测与分子靶向治疗[J]. 张琨琨,辇伟奇.  检验医学与临床. 2012(22)
[3]肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化定量检测研究[J]. 潘世扬,谢而付,束永前,高丽,张丽霞,陈丹,陈进步,赵文君,穆原,张寄南.  癌症. 2009(04)
[4]锁核酸的特点及其应用[J]. 李生茂,徐祥,梁华平,李磊.  生物化学与生物物理进展. 2003(03)

博士论文
[1]应用单个锁核酸修饰的探针提高对非互补杂交识别能力的研究[D]. 朴贤玉.中国医科大学 2009



本文编号：3378883