BML-111通过ILK通路抑制TAMs诱导的三阴性乳腺癌细胞EMT、迁移及转移
发布时间：2021-09-05 20:11
研究背景及目的:乳腺癌（Breast Cancer,BC）是全球女性最常见且死亡率最高的癌症,三阴性乳腺癌（Triple-negative Breast Carcinomas,TNBC）缺乏ER、PR、HER2等常见靶向受体的表达,具有更高的侵袭性及肿瘤微环境明显的异质性,相较于其它类型的BC,TNBC复发率、转移率更高,除常规的手术和化疗,缺乏更有效的治疗方法。肿瘤微环境中大部分免疫细胞是肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-Associated Macrophages,TAMs）,其中M2型TAMs与肿瘤的生长、转移、预后密切相关。脂氧素A4（Lipoxin A4,LXA4）在多种肿瘤发生发展过程中起重要作用,BML-111为其最常见的类似物。目前为止,LXA4及其类似物BML-111对于TNBC的治疗及作用尚未阐明,本实验拟研究BML-111对TNBC肿瘤细胞生物学行为的影响。我们推测BML-111能通过ILK通路抑制TAMs诱导的TNBC细胞EMT、迁移及转移。方法:1、收集南昌大学第二附属医院2017.8.1-2019.10.1TNBC患者信息及标本,检测及对比有、无转移患者的原发灶...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HE染色及E-cadherin、CD68免疫组化表达在三阴性乳腺癌非转移组的癌组织和转移组织中有差异，TNBC肿瘤中央组织与周围组织CD68表达有差异
第3章实验结果193.2BML-111抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞存活率我们通过MTT实验测定BML-111对TNBC细胞存活率的影响。预先设置了不同浓度的BML-111（100μg/L，200μg/L，400μg/L，800μg/L）处理TNBC细胞，观察结果表明（图2A、B），BML-111对TNBC细胞存活率影响呈浓度依赖性，且在BML-111浓度为800μg/L时对细胞的抑制率最高，因此在后续的实验中我们将采用此浓度。如图2C、D所示，TAMs的上清液可增加细胞活性，但800μg/LBML-111仍能抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞活性。然而，这种作用能被FPR2/ALX（LXA4的受体）的特异性抑制剂BOC-2阻断，提示FPR2/ALX可能参与TAMs诱导MDA-MB-231和4T1细胞存活的机制。图2A、B示BML-111浓度为800μg/L时对TNBC细胞抑制率最高（***P＜0.001）。C、D示BML-111抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞存活率（****P<0.0001CMvs.CM+BML-111）。MTT实验之后，我们通过三维细胞培养实验来研究BML-111对MDA-MB-231和4T1细胞长期作用。在用BML-111处理细胞24小时之后停药，并于第7天观察各组细胞状态（如图3所示）。CM+BML-111组较CM组细胞
第3章实验结果20团的形成明显更少，且具有统计学意义（P<0.01），CM组与Control组相比无明显差异，但CM组细胞团更大，由更多的细胞构成。结果提示我们BML-111具有抑制TAMs诱导MDA-MB-231和4T1细胞三维培养中细胞簇的形成作用，这表明BML-111对TNBC细胞具有长期作用。图3在三维细胞培养实验中BML-111抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞三维培养中细胞团的形成作用3.3BML-111抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞迁移能力我们按照实验拟行分组，进行细胞划痕实验，用倒置显微镜拍摄不同条件培养0h及24h后的细胞，结果如图3A1、A2所示。正常培养基培养的TNBC细胞加入BML-111后细胞迁移率降低，Control组vsBML-111组具有统计学差异（P＜0.05），CM组较CM+BML-111组细胞迁移率显著增加，有统计学意义（P＜0.05），但BOC-2能逆转BML-111的这种作用。这表明BML-111具有抑制TNBC细胞迁移能力，尤其是对TAMS诱导后细胞抑制作用更明显，BOC-2减弱了BML-111的作用。Transwell实验研究BML-111对TNBC细胞穿膜能力的作用。如图3B1、B2所示，CM诱导后，MDA-MB-231和4T1细胞穿膜的细胞数增多，加入BML-111后，穿膜的细胞数明显减少，两组相比具有统计学差异（P＜0.05），加入BOC-2后，细胞数增多。这表明BML-111具有抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞穿膜的作用，但该作用可被BOC-2抑制。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PARP1在三阴性乳腺癌组织中的表达及其与EMT的相关性[J]. 陈机琼,冯慧艳,林丹丽,黄嘉琴,蔡美婷,李玉荣. 现代肿瘤医学. 2020(03)
[2]BML-111下调c-Met抑制Hela细胞迁移和侵袭的研究[J]. 崔瑜,樊秦娥,李晶,校林姣,李春义. 中国免疫学杂志. 2019(03)
[3]权威观点[J]. 中国金融家. 2018(07)
本文编号：3386011
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HE染色及E-cadherin、CD68免疫组化表达在三阴性乳腺癌非转移组的癌组织和转移组织中有差异，TNBC肿瘤中央组织与周围组织CD68表达有差异
第3章实验结果193.2BML-111抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞存活率我们通过MTT实验测定BML-111对TNBC细胞存活率的影响。预先设置了不同浓度的BML-111（100μg/L，200μg/L，400μg/L，800μg/L）处理TNBC细胞，观察结果表明（图2A、B），BML-111对TNBC细胞存活率影响呈浓度依赖性，且在BML-111浓度为800μg/L时对细胞的抑制率最高，因此在后续的实验中我们将采用此浓度。如图2C、D所示，TAMs的上清液可增加细胞活性，但800μg/LBML-111仍能抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞活性。然而，这种作用能被FPR2/ALX（LXA4的受体）的特异性抑制剂BOC-2阻断，提示FPR2/ALX可能参与TAMs诱导MDA-MB-231和4T1细胞存活的机制。图2A、B示BML-111浓度为800μg/L时对TNBC细胞抑制率最高（***P＜0.001）。C、D示BML-111抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞存活率（****P<0.0001CMvs.CM+BML-111）。MTT实验之后，我们通过三维细胞培养实验来研究BML-111对MDA-MB-231和4T1细胞长期作用。在用BML-111处理细胞24小时之后停药，并于第7天观察各组细胞状态（如图3所示）。CM+BML-111组较CM组细胞
第3章实验结果20团的形成明显更少，且具有统计学意义（P<0.01），CM组与Control组相比无明显差异，但CM组细胞团更大，由更多的细胞构成。结果提示我们BML-111具有抑制TAMs诱导MDA-MB-231和4T1细胞三维培养中细胞簇的形成作用，这表明BML-111对TNBC细胞具有长期作用。图3在三维细胞培养实验中BML-111抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞三维培养中细胞团的形成作用3.3BML-111抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞迁移能力我们按照实验拟行分组，进行细胞划痕实验，用倒置显微镜拍摄不同条件培养0h及24h后的细胞，结果如图3A1、A2所示。正常培养基培养的TNBC细胞加入BML-111后细胞迁移率降低，Control组vsBML-111组具有统计学差异（P＜0.05），CM组较CM+BML-111组细胞迁移率显著增加，有统计学意义（P＜0.05），但BOC-2能逆转BML-111的这种作用。这表明BML-111具有抑制TNBC细胞迁移能力，尤其是对TAMS诱导后细胞抑制作用更明显，BOC-2减弱了BML-111的作用。Transwell实验研究BML-111对TNBC细胞穿膜能力的作用。如图3B1、B2所示，CM诱导后，MDA-MB-231和4T1细胞穿膜的细胞数增多，加入BML-111后，穿膜的细胞数明显减少，两组相比具有统计学差异（P＜0.05），加入BOC-2后，细胞数增多。这表明BML-111具有抑制TAMs诱导的MDA-MB-231和4T1细胞穿膜的作用，但该作用可被BOC-2抑制。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PARP1在三阴性乳腺癌组织中的表达及其与EMT的相关性[J]. 陈机琼,冯慧艳,林丹丽,黄嘉琴,蔡美婷,李玉荣. 现代肿瘤医学. 2020(03)
[2]BML-111下调c-Met抑制Hela细胞迁移和侵袭的研究[J]. 崔瑜,樊秦娥,李晶,校林姣,李春义. 中国免疫学杂志. 2019(03)
[3]权威观点[J]. 中国金融家. 2018(07)
本文编号：3386011
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