Diaphanous related formin 3 （DIAPH3）在结直肠癌中的临床意义与生物学功能机制研究
发布时间：2021-09-16 18:07
目的本研究的目的是探讨细胞骨架调节蛋白Diaphanous related formin 3（DIAPH3）在结直肠癌中的表达水平与结直肠癌临床进展及预后的相关性,并且进一步明确DIAPH3对结直肠癌细胞株的增殖迁移能力的影响及调节机制。方法1.收集1 18例结直肠癌患者癌组织及配对的癌旁正常黏膜组织,利用组织免疫组化检测各个组织中DIAPH3的表达量,探索DIAPH3在结直肠癌表达水平与患者临床病理特征的相关性。同时利用TCGA数据库分析DIAPH3表达水平对结直肠癌患者的预后影响。2.运用Western Blot检测不同结直肠癌细胞株与正常结肠粘膜上皮细胞株中DIAPH3表达水平的差异。选择表达量较高的结直肠癌细胞株进行慢病毒转染抑制DIAPH3的表达,qPCR与Western Blot验证转染效率,选择最有效的转染片段的结直肠癌细胞株进行细胞增殖以及迁移能力的检测。3.将转染细胞分为空白对照组si-NC与转染组si-DIAPH3,分别利用CCK-8,克隆形成检测DIAPH3对结直肠癌细胞株增殖能力的影响;同时利用细胞划痕愈合实验及Transwell方法检测其对结直肠癌细胞株的迁移...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＤＩＡＰＨ分子内自抑制环状结构??－－ｒｖｎ?Ｐｒｎ
蛋白，相比于含有酪氨酸－微管蛋白谷氨??酸－微管蛋白具备更优的结合活性，因此微管蛋白装配和拆卸过程中速率显著??降低。??Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ?Ｅｎｄ?Ｂｉｎｄｉｎｇ?Ｐｒｏｔｉ＇ｉｎ??Ａｃｔｉｖｃｄ?［Ｊ?Ｄｅｔｙｒｏｓｉｎａｌｉｏｎ?，??５?．?ａｎｄ?（；ｌｉ＂ａｎ”ｌａｔｉｏｎ?＋?Ｓ１?丨：??、?Ｊ?＿Ｊ＿＿?丨?Ｉ?Ｉ?丨丨?Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ??ｒｒｖｉｐｒ＾?ｉ?Ｓ＇！：：＇?Ａｓｓｅｍｂｌｅ?ｏｒ?Ｄｉｓｍａｎｔｌｅ??ｙＳｏＥｐ?＿??图２－１?ＤＩＡＰＨ３通过ＦＨ１－ＦＨ２结构域调控微管的机制??Ｆｉｇ?２－１?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?Ｄ１ＡＰＨ３?ｉｎ?ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ?ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ?ｔｈｒｏｕｇｈ?ｃｏｒｅ?ｄｏｍａｉｎ?ＦＨ１?ａｎｄ?ＦＨ２??再者，研究为了进一步验证了其他微管蛋白与ＤＩＡＰＨ３的是否也存在关联，??也同时检测／微管蛋白家族中的：ａ－ｔｕｂｕｌｉｎ，（３－ｔｕｂｕｌｉｎ，以及ｔｕｂｕｌｉｎ?ｐ?ＩＩＩ，??ＧＦＰ－ｔｕｂｕｌｉｎ。研究同样发现，下调ＤＩＡＰＨ３的前列腺癌细胞中微管发生剧烈的??５??
ＡＰＨ３?—?ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３??２，０?－?一?ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ?ｊ?２．０?－?—?ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ?｜??１．５?－?／?＊?１．５?－?Ｘ?＊??ｌＬ〇?■??０．５?－?０．５?－??ＫＭ１２?ＳＷ４８０??０？０?ｉ?ｔ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?０．０?■■?ｆ＂＂＂?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｔ??０?２４?４８?７２?９６?１２０?０?２４?４８?７２?９６?１２０??Ｔｉｍｅ?（ｈｏｕｒｓ）?ｇ?Ｔｉｍｅ?（ｈｏｕｒｓ）??图３－３?ＫＭ?１２和ＳＷ４８０细胞中下调组ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３和对照组ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ的克隆形成能力（Ａ）以及??细胞增殖活力（Ｂ）对比??Ｆｉｇ?３－３：?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?Ｃｏｌｏｎｙ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ａｂｉｌｉｔｙ?（Ａ）?ａｎｄ?ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?（Ｂ）?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３??ａｎｄ?ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ?ｉｎ?ＳＷ４８０?ａｎｄ?ＫＭ?１２??３．４．３敲减ＤＩＡＰＨ３的表达后增强结直肠癌细胞的迁移能力。??使用Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ与划痕愈合实验检测ＫＭ１２和ＳＷ４８０中下调组ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３??和对照组ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ的的细胞迁移能力。如图Ａ所示，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ结果提示，下??调组ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３迁移到下室的细胞数较ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ组多，且图Ｂ表明，划痕愈??合实验中，下调组ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３划痕愈合速度较ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏ丨组快多在ＫＭ１２和??ＳＷ４８０细胞中下调组ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３的细对照组明显减弱，差异有统计学意义??３４??
【参考文献】：
期刊论文
[1]2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J]. 郑荣寿,孙可欣,张思维,曾红梅,邹小农,陈茹,顾秀瑛,魏文强,赫捷. 中华肿瘤杂志. 2019 (01)
[2]Caspase-3和DIAPH-3蛋白在浸润性乳腺癌组织中的表达及临床意义[J]. 杨胜利,曹芳芹,郭粉莉,吕萍,王芳. 中国妇幼保健. 2017(02)
[3]Cancer metastases: challenges and opportunities[J]. Xiangming Guan. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2015(05)
硕士论文
[1]DIAPH3与上皮、间质标志物在大肠癌组织中的表达及意义[D]. 王国荣.南昌大学 2014
本文编号：3397042
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＤＩＡＰＨ分子内自抑制环状结构??－－ｒｖｎ?Ｐｒｎ
蛋白，相比于含有酪氨酸－微管蛋白谷氨??酸－微管蛋白具备更优的结合活性，因此微管蛋白装配和拆卸过程中速率显著??降低。??Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ?Ｅｎｄ?Ｂｉｎｄｉｎｇ?Ｐｒｏｔｉ＇ｉｎ??Ａｃｔｉｖｃｄ?［Ｊ?Ｄｅｔｙｒｏｓｉｎａｌｉｏｎ?，??５?．?ａｎｄ?（；ｌｉ＂ａｎ”ｌａｔｉｏｎ?＋?Ｓ１?丨：??、?Ｊ?＿Ｊ＿＿?丨?Ｉ?Ｉ?丨丨?Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ??ｒｒｖｉｐｒ＾?ｉ?Ｓ＇！：：＇?Ａｓｓｅｍｂｌｅ?ｏｒ?Ｄｉｓｍａｎｔｌｅ??ｙＳｏＥｐ?＿??图２－１?ＤＩＡＰＨ３通过ＦＨ１－ＦＨ２结构域调控微管的机制??Ｆｉｇ?２－１?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?Ｄ１ＡＰＨ３?ｉｎ?ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ?ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ?ｔｈｒｏｕｇｈ?ｃｏｒｅ?ｄｏｍａｉｎ?ＦＨ１?ａｎｄ?ＦＨ２??再者，研究为了进一步验证了其他微管蛋白与ＤＩＡＰＨ３的是否也存在关联，??也同时检测／微管蛋白家族中的：ａ－ｔｕｂｕｌｉｎ，（３－ｔｕｂｕｌｉｎ，以及ｔｕｂｕｌｉｎ?ｐ?ＩＩＩ，??ＧＦＰ－ｔｕｂｕｌｉｎ。研究同样发现，下调ＤＩＡＰＨ３的前列腺癌细胞中微管发生剧烈的??５??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J]. 郑荣寿,孙可欣,张思维,曾红梅,邹小农,陈茹,顾秀瑛,魏文强,赫捷. 中华肿瘤杂志. 2019 (01)
[2]Caspase-3和DIAPH-3蛋白在浸润性乳腺癌组织中的表达及临床意义[J]. 杨胜利,曹芳芹,郭粉莉,吕萍,王芳. 中国妇幼保健. 2017(02)
[3]Cancer metastases: challenges and opportunities[J]. Xiangming Guan. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2015(05)
硕士论文
[1]DIAPH3与上皮、间质标志物在大肠癌组织中的表达及意义[D]. 王国荣.南昌大学 2014
本文编号：3397042
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