ASP2215联合SAHA对FLT3-ITD突变细胞株协同机制研究

发布时间：2021-09-22 17:56

　　目的和意义:急性髓细胞白血病（AML）是一种高度侵袭性的血液恶性肿瘤,其发生发展与某些基因改变密切相关。其中的FLT3-ITD突变是AML中的常见突变,伴有该突变的患者预后不良。近年来,人们致力于开发FLT3酪氨酸激酶抑制剂,但单药使用效果有限,因而尝试FLT3抑制剂联合其他种类药物的应用。本研究着眼于伴FLT3-ITD突变AML的药物联合治疗,探讨FLT3抑制剂ASP2215联合HDAC抑制剂SAHA作用FLT3-ITD突变细胞株的药物协同性及协同作用机制,为将来这两类药物联合治疗FLT3-ITD突变AML提供理论基础。方法:以不同浓度的ASP2215、SAHA单药或两药联合处理伴FLT3-ITD突变的MV4-11细胞株,CCK-8法检测细胞活性,细胞甩片后瑞氏染色观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,蛋白免疫印迹检测FLT3及下游分子STAT5的磷酸化水平,凋亡相关蛋白caspase-3/9,Mcl-1,Bcl-xL,Bcl-2和Bax以及周期相关蛋白cyclin D1、CDK 6和P27^Kip1蛋白的表达水平,使用实时定量PCR技术检测cycl... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

FLT3受体结构示意图

图 1. FLT3 受体结构示意图。Figure 1. Schematic diagram of FLT3 receptor structureFLT3 受体为单次跨膜糖蛋白，从 N 端到 C 端依次为：包含 5 个免疫球蛋白样结构域的胞外结构域（ED）；跨膜结构域(TD)；胞内近膜结构域（JMD）；酪氨酸激酶结构域 1（TKD 1）；激酶间插入序列（KI）；酪氨酸激酶结构域 2（TKD2）。其中串联重复序列（ITD）插入的区域通常位于JMD 和 TKD1 内。

上海交通大学硕士学位论文V4-11 髓系细胞株含 FLT3-ITD 纯合突变MV4-11 细胞株委托中科院细胞生物研究所购自美国 ATCC。提取 MV4 THP-1 细胞株的基因组 DNA，设计针对 FLT3 基因 14，15 号外显子的 PCR，对基因组 DNA 行 PCR 扩增，扩增产物经 2.5%琼脂糖凝胶电泳。实验结果，相对于 THP-1 细胞的野生型 FLT3，MV4-11 细胞为 FLT3-ITD 纯合突变（ 3A）。 代测序结果确定了 13 号染色体 FLT3 等位基因 14 号外显子内纯合 入 了 段 30bp 的 串 联 重 复 片 段 ， 插 入 的 重 复 片 段 序 列 CGTTGATTTCAGAGAATATGAATATGATC（见图 3B）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]组蛋白去乙酰化抑制剂SBHA对急性髓细胞白血病细胞的杀伤作用[J]. 徐燕华,杨春梅,钱文斌.  浙江大学学报(医学版). 2012(05)



本文编号：3404151