齐墩果酸通过miR-122/Cyclin G1/MEF2D对肺癌细胞增殖影响的研究
发布时间：2021-09-24 09:36
目的:齐墩果酸（OA）是一种从植物中提取的化合物,具有抗肿瘤活性。然而,OA对细胞周期抑制作用的机制还没有完全研究清楚。本研究设计通过几种肺癌细胞探讨OA引起与细胞周期相互作用的分子机制。CCNG1和MEF2D,两者是被公认的miR-122作用靶点,发现在OA作用后表达下调。维持CCNG1和MEF2D蛋白的正常表达可以抑制OA对肺癌细胞抗癌效应。本研究主要证实在肺癌细胞中OA能刺激miR-122转录调节因子表达,验证在肺癌细胞中OA所致的细胞周期阻滞是通过miR-122/CyclinG1/MEF2D途径,有助于阐释齐墩果酸抗肿瘤活性的分子机制。方法:（1）MTT法检测OA处理肺癌细胞系A549、NCI-H460、NCI-H1299以及肺癌原始细胞（Primary LC1和Primary LC1）的时间依赖增值率和剂量依赖增值率;（2）Quantitative-PCR检测不同剂量和不同时间的OA处理的肺癌细胞系A549、NCI-H460、NCI-H1299、Primary LC1、Primary LC1和MRC-5细胞中miR-122的表达水平。（3）通过使用miR-122阻断剂,降低m...
【文章来源】：济南大学山东省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
研究生导师和课题指导小组成员介绍
中文摘要
Abstract
第一章 前言
第二章 材料和方法
2.1 材料和方法
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.2 实验方法
2.2.1. 细胞系及培养方法和原代细胞采集
2.2.2. MTT法检测细胞生存率
2.2.3.反转录PCR(RT-PCR，reverse transcription PCR)
2.2.4.CCNG1-MEF2D载体表达
2.2.5.细胞中总蛋白提取方法
2.2.6. 细胞蛋白浓度测定方法
2.2.7. Western Blot
2.2.8. 转染pc DNA3-CCNG1 +pc DNAMEF2D至A549、Primary LC1细胞
2.2.9. 动物实验
2.3.统计学方法
第三章 结果
3.1 MTT 法检测 OA 处理肺癌细胞系 A549、NCI-H460、NCI-H1299以及肺癌原始细胞（Primary LC1 和 Primary LC1）的时间依赖增值率和剂量依赖增值率
3.2 Quantitative-PCR检测不同剂量和不同时间的OA处理的肺癌细胞系A549、NCI-H460、NCI-H1299、Primary LC1、Primary LC1和MRC-5 细胞中mi R-122的表达水平
3.3 通过使用mi R-122阻断剂，降低mi R-122的表达水平观察OA对肺癌细胞A549和Primary LC1的作用
3.4 为进一步探讨OA通过mi R-122抑制肿瘤细胞增殖的作用，进一步通过Western Blot法检测OA处理过的肺癌细胞中CCNG1和MEF2D蛋白的表达水平
3.5 通过转染pc DNA3-CCNG1 +pc DNAME F2D至A549、Pri mary LC1细胞，观察OA对CCNG1和MEF2D蛋白的表达的影响
3.6 为进一步探讨OA是否增加mi R-122的表达水平。Western Blot法检测不同时间段和不同剂量的OA处理过的A549细胞中HNF1α、HNF3β、HNF4α和HNF6蛋白的表达水平
3.7 通过癌细胞种植建立小鼠肺癌模型，通过不同剂量的OA处理种植小鼠，观察肿瘤细胞生长的体积，Quantitative-PCR法检测瘤体中miR-122的表达水平，Western Blot法检测瘤体中CCNG1和MEF2D蛋白的表达水平
第四章 讨论
4.1 齐墩果酸（OA)抑制mRNA122基因的表达对肺癌细胞的抑制
4.2 提高CCNG1和MEF2D蛋白水平的表达可以降低肺癌细胞的增殖率
第五章 结论
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞周期蛋白G1、G2与恶性肿瘤的研究进展[J]. 叶星星,蔡志毅,刘池波. 温州医学院学报. 2011(03)
[2]孕激素诱导cyclin G1在小鼠子宫内膜上皮细胞的表达及其对细胞增殖的影响[J]. 马琰岩,范轶,白玛康卓,张金虎,何亚萍,喻琳鳞,岳利民. 生理学报. 2008(04)
本文编号：3407527
【文章来源】：济南大学山东省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
研究生导师和课题指导小组成员介绍
中文摘要
Abstract
第一章 前言
第二章 材料和方法
2.1 材料和方法
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.2 实验方法
2.2.1. 细胞系及培养方法和原代细胞采集
2.2.2. MTT法检测细胞生存率
2.2.3.反转录PCR(RT-PCR，reverse transcription PCR)
2.2.4.CCNG1-MEF2D载体表达
2.2.5.细胞中总蛋白提取方法
2.2.6. 细胞蛋白浓度测定方法
2.2.7. Western Blot
2.2.8. 转染pc DNA3-CCNG1 +pc DNAMEF2D至A549、Primary LC1细胞
2.2.9. 动物实验
2.3.统计学方法
第三章 结果
3.1 MTT 法检测 OA 处理肺癌细胞系 A549、NCI-H460、NCI-H1299以及肺癌原始细胞（Primary LC1 和 Primary LC1）的时间依赖增值率和剂量依赖增值率
3.2 Quantitative-PCR检测不同剂量和不同时间的OA处理的肺癌细胞系A549、NCI-H460、NCI-H1299、Primary LC1、Primary LC1和MRC-5 细胞中mi R-122的表达水平
3.3 通过使用mi R-122阻断剂，降低mi R-122的表达水平观察OA对肺癌细胞A549和Primary LC1的作用
3.4 为进一步探讨OA通过mi R-122抑制肿瘤细胞增殖的作用，进一步通过Western Blot法检测OA处理过的肺癌细胞中CCNG1和MEF2D蛋白的表达水平
3.5 通过转染pc DNA3-CCNG1 +pc DNAME F2D至A549、Pri mary LC1细胞，观察OA对CCNG1和MEF2D蛋白的表达的影响
3.6 为进一步探讨OA是否增加mi R-122的表达水平。Western Blot法检测不同时间段和不同剂量的OA处理过的A549细胞中HNF1α、HNF3β、HNF4α和HNF6蛋白的表达水平
3.7 通过癌细胞种植建立小鼠肺癌模型，通过不同剂量的OA处理种植小鼠，观察肿瘤细胞生长的体积，Quantitative-PCR法检测瘤体中miR-122的表达水平，Western Blot法检测瘤体中CCNG1和MEF2D蛋白的表达水平
第四章 讨论
4.1 齐墩果酸（OA)抑制mRNA122基因的表达对肺癌细胞的抑制
4.2 提高CCNG1和MEF2D蛋白水平的表达可以降低肺癌细胞的增殖率
第五章 结论
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞周期蛋白G1、G2与恶性肿瘤的研究进展[J]. 叶星星,蔡志毅,刘池波. 温州医学院学报. 2011(03)
[2]孕激素诱导cyclin G1在小鼠子宫内膜上皮细胞的表达及其对细胞增殖的影响[J]. 马琰岩,范轶,白玛康卓,张金虎,何亚萍,喻琳鳞,岳利民. 生理学报. 2008(04)
本文编号：3407527
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