miR-17家族在肿瘤生长和迁移中的作用及机制

发布时间：2017-05-02 20:00

  本文关键词：miR-17家族在肿瘤生长和迁移中的作用及机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：非编码RNA在基因组中占有很大比例,对非编码RNA的功能研究逐渐引起了人们的关注,microRNA (miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为18-24个核苷酸的非编码单链RNA分子,它们在生物体中参与转录后基因表达调控。miRNA17-5p、20a同属于miRNA17家族、miRNA17-92 cluster,miRNA17家族已被报道在肿瘤细胞中高表达,对其在肿瘤发生、衰老中的调控作用有很大的研究意义。本实验通过decoy技术抑制miRNA17家族在乳腺癌中表达,鉴定其对抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭的作用。miR-17家族一共包含8个miRNA,他们第二到第八个碱基具有高度同源性,称为种子序列。通过构建一个包含可以与miRNA17家族互补序列的慢病毒载体来感染乳腺癌细胞。通过这种decoy技术降低miRNA17家族在乳腺癌细胞中的表达,记录肿瘤细胞增殖情况,绘制细胞生长曲线,确定decoy17能否抑制肿瘤细胞增殖,并通划痕实验和transwell实验确定decoy17对肿瘤细胞增殖、迁移能力的影响。在小鼠体内进一步验证实验结果,并探索miRNA与下游靶蛋白的作用机制。通过这些探索,有望发现一种新的抑制肿瘤的方法
【关键词】：非编码RNA miRNA17家族 肿瘤 增殖 迁移 Decoy技术
【学位授予单位】：杭州师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.2
【目录】：

• 致谢5-6
• 前言6-8
• 摘要8-9
• Abstract9-12
• 1 绪论12-15
• 1.1 miRNA的发现12
• 1.2 miRNA的生物合成12-14
• 1.3 miRNA的功能14
• 1.4 miR-17家族14-15
• 2 实验材料和方法15-33
• 2.1 实验材料15-21
• 2.1.1 细胞系和菌株15
• 2.1.2 质粒15
• 2.1.3 工具酶等15-16
• 2.1.4 试剂盒16
• 2.1.5 抗体16
• 2.1.6 常用试剂和缓冲液16-20
• 2.1.7 其他主要试剂和耗材20-21
• 2.1.8 主要仪器21
• 2.2 实验方法21-33
• 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备21-22
• 2.2.2 细菌的转化22
• 2.2.3 菌种冻存22
• 2.2.4 质粒的扩增22-23
• 2.2.5 质粒的提取23-24
• 2.2.6 质粒DNA/RNA浓度及纯度测定24
• 2.2.7 细胞复苏、传代和冻存24-25
• 2.2.8 细胞总RNA的抽提25
• 2.2.9 cDNA的制备25
• 2.2.10 RT-PCR25-26
• 2.2.11 实时荧光定量PCR26
• 2.2.12 质粒的构建26-27
• 2.2.13 转染27
• 2.2.14 蛋白质浓度测定27
• 2.2.15 免疫印迹27-29
• 2.2.16 包装病毒、感染29-30
• 2.2.17 克隆形成30-31
• 2.2.18 软琼脂培养克隆形成试验31
• 2.2.19 裸鼠皮下注射31
• 2.2.20 划痕实验31-32
• 2.2.21 Transwell32
• 2.2.22 检测不同细胞周期细胞比例32-33
• 3、实验结果33-41
• 3.1 Decoy技术抑制miR17家族表达33-34
• 3.2 Decoy技术可以抑制WI-38细胞增殖34-36
• 3.3 Decoy技术对抑制Mcf7细胞迁移有显著影响36-37
• 3.4 Decoy技术对miRNA17家族下游蛋白影响37-39
• 3.5 通过decoy抑制miR-17家族表达后,不同细胞周期时像的比例变化39-40
• 3.6 抑制miR17家族在体内抑制肿瘤生长40-41
• 4、讨论41-42
• 参考文献42-50

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