选择性下调肿瘤相关SAMHD1对于提高阿糖胞苷对急性髓系白血病杀伤效果研究

发布时间：2021-10-11 07:40

　　研究背景:急性髓系白血病（AML）是一种常见的血液系统肿瘤,起病急,预后较差。阿糖胞苷（ara-C）是用于治疗AML的主要一线化疗药,耐药是造成AML治疗失败的主要原因。研究发现,SAMHD1是一种新的ara-C耐药因子,可以减弱ara-C对于AML的杀伤作用,造成治疗失败。因而,特异性抑制肿瘤细胞中的SAMHD1提供了一种提高阿糖胞苷有效性的潜在有效方法。但是,目前并无可用的针对肿瘤细胞中SAMHD1的抑制剂。研究方法:本研究通过质谱系统（MS）、免疫共沉淀（co-IP）以及免疫荧光（IF）的方法来证明SAMHD1和HSP90在AML细胞中的相互作用,并且利用截短突变体鉴定出其特定的结合区域。再者,采用免疫印迹（WB）和荧光定量PCR（qRT-PCR）等方法被用来检测HSP90抑制剂处理后的细胞中SAMHD1及其它蛋白的表达变化。本研究也通过MTT方法在体外水平、以及使用AML疾病模型B-NDG小鼠在体内水平证明了 ara-C和HSP90抑制剂联合用药的效果。此外,我们还使用了免疫细胞和肿瘤细胞共培养技术来研究HSP90抑制剂对于鼠免疫细胞的影响。实验结果:我们首次发现SAMHD1在... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．１?ＰＬＫＯ．ｌ?ｐｕｒｏ质粒载体图谱??２．２．９

浙江大学硕土学位论．文?正文ＩＩＳＰ９０在ＡＭＬ．細胞中可：以在蛋白：水平上调节ＳＡ．Ｍ１Ｄ１??验，结合蛋白用质谱进行分析来鉴定其结合因子。如图２．２在与ＳＡＭＨＤ１结合的??蛋白谱中，我们注意到了?ＨＳＰ９０这个蛋白，因其作为一个常见的细胞伴侣，其在??维持蛋白稳定、成熟中扮演着重要的作用３９。??？？？？?ＨＩＳＴ２Ｈ２ＢＥ??？?ｈｓｐｏｉ??Ｉ?、一?—?／?＿?个?＼??＊?ＩＬＦ２?＾?／?ＳＬＣ２ＳＡＳ＾?／?Ｅ，Ｆ５Ａ??＼?？？ｎｐａ２ｂ，?？?＾?＼?＼?／?ＡＴＰａｓｅ??１?删?Ｄ；?＇＜?＿??＼?ＨＮＲＮＰＡ１?—?ＨＳＰＡ５??ｐａｂｐｃｉ?瞻隱?＼?＇＿３??＿ａ＿８ＭＣ３??图２．２质谱分析与ＳＡＭＨＤ１结合的蛋白??在ＨＥＫ２９３Ｔ细胞中转染ＳＡＭＨＤ１－ＨＡ质粒，而后进行ｃｏ－ＩＰ：?ＨＡ，再用??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ的方法确定了?ＳＡＭＨＤ１和ＨＳＰ９０的相互作用。接下来，我们、用??Ｐｒｏｔｅｉｎ?Ａ／Ｇ磁珠结合ＨＳＰ９０特异性抗体做ｃｏ－ＩＰ实验，确定了其在ＴＨＰ－１和Ｍｏｌｍ－??１３这些ＡＭＬ细胞系中内源的相互作用关系（图２．３）。??ＨＥＫ２９３Ｔ??ＳＡＭＨＤ１＊ＨＡ?＿―＂厂咖?＿＾＿?—ＭＳｔ－２３＿??ＩＢ：???｜Ｂ；?ＩＰ：Ｉ？Ｇ?ＩＰ；ＨＳＰ９０?Ｗ＞ａ?，Ｂ；?ＩＰ：ｌｇＧ?ＩＰ：ＨＳＰ９０?ｋＯａ??ＨＳＰ９Ｃ?“?ＨＳＰ９０?Ｉ?｜￣１〇〇?｜?ＨＳＰ９０??Ｉ??１?一?Ｉｎｐｕｔ?ｎｐｕｔ?????ｎｐｕｔ??ＨＡ?｜?ｍｍ＼?—?７０?ＳＡＭＫ５１?｜?７０?

图２．３?Ｃｏ－ＩＰ结果钲明ＳＡＭＨＤ１与ＨＳＰ９０结合??


本文编号：3430083