miR-34a/miR-335对survivin的表达调控及在胃癌中的生物功能学研究
发布时间：2021-10-22 10:12
研究背景和目的：胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一,在国内外发病率均较高。世界范围内其死亡率高居恶性肿瘤的第2位。胃癌发病与多种因素有关,考虑为环境与基因因素复杂的交互作用。然而,具体的发病机制仍需进一步阐明。胃癌的诊断主要依靠胃十二指肠镜检结合组织学病理检测。病理类型以腺癌为主,根据浸润深度分为早期胃癌,进展期胃癌。在我国,早期胃癌的检出率低,临床确诊的病例多为进展期胃癌。胃癌的治疗目前是以胃癌根治术为基础的综合治疗。早期胃癌预后较好,手术治疗后5年生存率可以达到90%以上,但是进展期胃癌术后容易复发转移,预后差,死亡率高。为提高疗效,术后多需辅助放化疗治疗。胃癌细胞对放射治疗敏感性低,目前临床上多不主张术前放疗,仍以化疗为主。虽然近年来不断有化疗药物的更新换代及一些新的观念与治疗措施如术前新辅助化疗、术中化疗等出现,辅助治疗的效果并未出现根本性的改观,中晚期患者5年生存率并未得到明显改善。因此,更加深入的探索胃癌的发生发展机制以及探寻更加有效的治疗措施显得更为重要。正常胃上皮细胞恶变的分子基础为胃正常粘膜上皮细胞增殖与凋亡的失衡,而其平衡则依赖大量癌基因、抑癌基因以及细胞因子等的调控...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１．胃癌及癌旁正常组织利用ｍｉ民ＮＡ基因芯片技术高通量检测后热图分析结果??Ｆｉｇ．ｌ－?１?Ｃｌｕｓｔｅｒ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｅｘｐｒｅ巧ｅｄ?ｍｉＲＮＡｓ?ｉｎ?ＧＣ?ｓａｍｐｌｅｓ?
ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因作为进一步研究目标。结果发现ｓｕｒｖｉｖｉｎ?ｍＲＮＡ的３’ＵＴＲ存在ｍｉＲ－３３５结合的位点，如上图所示。因此，针对此预测的结合位点，我们相应的报告基因载体，拟进行双巧光素酶报告基因实验验证该结合位点。??２．２．２?ｍ瓜－３３５与ｓｕｒｖｉｖｉｎ结合目标巧点验证??
?ＢＩＲＣＳ＾?ＢｉＲＣ－ｒｏｕｔ??图２－２?ｍ化－３３５直接结合于ｓｕｒｖｉｖｉｎ?ｍＲＮＡ?３’ＵＴ民端??Ｆｉｇ２－２?ＨＥＫ?２９３?Ｔ?ｃｄｌｓ?（ｂ）?ａｎｄ?ＳＧＣ－７９０１?ｃｅｌｌｓ?（ｃ）?＼ｖｅｉ＊ｅ?ｃｏ－ｔｒａｎｓｆｅｃ化ｄ?ｗｉ化?ｅｋｈｅｒ?１００?ｎＭ??ｍｉＲ－３３５?ｍｉｍｉｃｓ?ｏｒ?ＮＣ?ｏ＂ｇｏｓ?ａｎｄ?２００?口ｇ?ｄｕａｌ?ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ?ｒｅｐｏｒｔｅｒ?ｐｌａｓｍｉｄｓ?ｃａｒｒｙｉｎｇ?ｅｉ化ｅｒ?ＷＴ?ｏｒ??ＭＵＴ?３＇－ＵＴＲ?ｏｆ?ＢＩＲＣ５．Ｒｅｌａｔｉｖｅ?巧ｒｅｆｌｙ?ｌｕｃｉｆｅｉ‘ａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｍｅａｓｕｒｅｄ?２４?ｈ?ａｆｔｅｒ?化ａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ａｎｄ??ｗａｓ?ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ?ｗｉｔｈ?ｒｅｎｉｌｌａ?ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ．??双巧光素酶报告基因系统是一种经典的用于验证ｍｉＲＮＡ与祀基因相结合的??实验方法。根据软件预测的ｍｉＲ－３３５与ｓｕｒｖｉｖｉｎ可能的结合位点，我们首先将包含??有该结合位点的序列片段（野生型及突变型）插入焚光载体中，构建癸光质粒。??野生型及突变型分别命名为ｐｍｉｒＧＬＯ－ＢＩＲＣ５－ＷＴ和ｐｍｉｒＧＬＯ－Ｂ化Ｃ５－ＭＵＴ。利用??双巧光素酶报告基因法检测共转染ｍｉＲ－３３５?ｍｉｍｉｃ或ｎｅｇｅｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ及野生型或??突变型质粒后焚光素酶活性的变化。结果发现与阴性对照相比，在ＨＥＫ２９３Ｔ细??胞株中观察到
【参考文献】：
期刊论文
[1]MiRNA as potential biomarkers and therapeutic targets for gastric cancer[J]. Vivian Yvonne Shin,Kent-Man Chu. World Journal of Gastroenterology. 2014(30)
[2]Survivin、COX-2及VEGF在大肠癌中的表达及与肿瘤微血管密度的关系[J]. 孔令建,赵晶,曲波,樊微微,高善玲. 世界华人消化杂志. 2009(20)
[3]Survivin:Potential role in diagnosis,prognosis and targeted therapy of gastric cancer[J]. Ting-Ting Wang,Xiao-Ping Qian,Bao-Rui Liu,Department of Oncology,Affiliated Gulou Hospital,Medical School of Nanjing University,Nanjing,210008,Jiangsu Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2007(20)
[4]Survivin、COX-2和VEGF在胃癌中的表达及其与预后的意义[J]. 王滔明,许建明,胡乃中. 临床消化病杂志. 2007(01)
[5]Survivin反义核酸对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响[J]. 潘克俭,刘小菁,杨春蕾,王玉明,王西岩. 生物医学工程学杂志. 2006(03)
[6]脂质体生存素反义寡核苷酸抑制胃癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用[J]. 付广,王国斌,卢晓明,杨春. 中华外科杂志. 2004(22)
[7]胃腺癌组织survivin基因的表达与细胞增殖及凋亡的相关性研究[J]. 姚学权,刘福坤,祁晓萍,吴波印,洪林,马恒辉,石群立,周晓军,黎介寿. 中华外科杂志. 2004(03)
本文编号：3450890
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１．胃癌及癌旁正常组织利用ｍｉ民ＮＡ基因芯片技术高通量检测后热图分析结果??Ｆｉｇ．ｌ－?１?Ｃｌｕｓｔｅｒ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｅｘｐｒｅ巧ｅｄ?ｍｉＲＮＡｓ?ｉｎ?ＧＣ?ｓａｍｐｌｅｓ?
ｓｕｒｖｉｖｉｎ基因作为进一步研究目标。结果发现ｓｕｒｖｉｖｉｎ?ｍＲＮＡ的３’ＵＴＲ存在ｍｉＲ－３３５结合的位点，如上图所示。因此，针对此预测的结合位点，我们相应的报告基因载体，拟进行双巧光素酶报告基因实验验证该结合位点。??２．２．２?ｍ瓜－３３５与ｓｕｒｖｉｖｉｎ结合目标巧点验证??
?ＢＩＲＣＳ＾?ＢｉＲＣ－ｒｏｕｔ??图２－２?ｍ化－３３５直接结合于ｓｕｒｖｉｖｉｎ?ｍＲＮＡ?３’ＵＴ民端??Ｆｉｇ２－２?ＨＥＫ?２９３?Ｔ?ｃｄｌｓ?（ｂ）?ａｎｄ?ＳＧＣ－７９０１?ｃｅｌｌｓ?（ｃ）?＼ｖｅｉ＊ｅ?ｃｏ－ｔｒａｎｓｆｅｃ化ｄ?ｗｉ化?ｅｋｈｅｒ?１００?ｎＭ??ｍｉＲ－３３５?ｍｉｍｉｃｓ?ｏｒ?ＮＣ?ｏ＂ｇｏｓ?ａｎｄ?２００?口ｇ?ｄｕａｌ?ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ?ｒｅｐｏｒｔｅｒ?ｐｌａｓｍｉｄｓ?ｃａｒｒｙｉｎｇ?ｅｉ化ｅｒ?ＷＴ?ｏｒ??ＭＵＴ?３＇－ＵＴＲ?ｏｆ?ＢＩＲＣ５．Ｒｅｌａｔｉｖｅ?巧ｒｅｆｌｙ?ｌｕｃｉｆｅｉ‘ａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｍｅａｓｕｒｅｄ?２４?ｈ?ａｆｔｅｒ?化ａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ａｎｄ??ｗａｓ?ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ?ｗｉｔｈ?ｒｅｎｉｌｌａ?ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ．??双巧光素酶报告基因系统是一种经典的用于验证ｍｉＲＮＡ与祀基因相结合的??实验方法。根据软件预测的ｍｉＲ－３３５与ｓｕｒｖｉｖｉｎ可能的结合位点，我们首先将包含??有该结合位点的序列片段（野生型及突变型）插入焚光载体中，构建癸光质粒。??野生型及突变型分别命名为ｐｍｉｒＧＬＯ－ＢＩＲＣ５－ＷＴ和ｐｍｉｒＧＬＯ－Ｂ化Ｃ５－ＭＵＴ。利用??双巧光素酶报告基因法检测共转染ｍｉＲ－３３５?ｍｉｍｉｃ或ｎｅｇｅｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ及野生型或??突变型质粒后焚光素酶活性的变化。结果发现与阴性对照相比，在ＨＥＫ２９３Ｔ细??胞株中观察到
【参考文献】：
期刊论文
[1]MiRNA as potential biomarkers and therapeutic targets for gastric cancer[J]. Vivian Yvonne Shin,Kent-Man Chu. World Journal of Gastroenterology. 2014(30)
[2]Survivin、COX-2及VEGF在大肠癌中的表达及与肿瘤微血管密度的关系[J]. 孔令建,赵晶,曲波,樊微微,高善玲. 世界华人消化杂志. 2009(20)
[3]Survivin:Potential role in diagnosis,prognosis and targeted therapy of gastric cancer[J]. Ting-Ting Wang,Xiao-Ping Qian,Bao-Rui Liu,Department of Oncology,Affiliated Gulou Hospital,Medical School of Nanjing University,Nanjing,210008,Jiangsu Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2007(20)
[4]Survivin、COX-2和VEGF在胃癌中的表达及其与预后的意义[J]. 王滔明,许建明,胡乃中. 临床消化病杂志. 2007(01)
[5]Survivin反义核酸对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响[J]. 潘克俭,刘小菁,杨春蕾,王玉明,王西岩. 生物医学工程学杂志. 2006(03)
[6]脂质体生存素反义寡核苷酸抑制胃癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用[J]. 付广,王国斌,卢晓明,杨春. 中华外科杂志. 2004(22)
[7]胃腺癌组织survivin基因的表达与细胞增殖及凋亡的相关性研究[J]. 姚学权,刘福坤,祁晓萍,吴波印,洪林,马恒辉,石群立,周晓军,黎介寿. 中华外科杂志. 2004(03)
本文编号：3450890
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