靶向CD105嵌合抗原受体T细胞抗肿瘤作用及机制研究

发布时间：2021-10-23 23:56

　　背景:恶性肿瘤严重危害人类的健康,目前肿瘤主要的传统治疗方法有手术、放疗和化疗。近年来免疫治疗已逐渐成为肿瘤治疗领域的焦点,其中免疫细胞过继治疗成为研究的热点,基于嵌合抗原受体修饰T细胞（Chimeric Antigen Receptor T-Cell,CAR T）的免疫疗法已经证明是一种有希望的癌症治疗策略,嵌合抗原受体T细胞通过基因工程技术使识别肿瘤特异性抗原的受体表达在T细胞表面,绕过抗原提呈阶段以及MHC的限制对肿瘤产生杀伤作用。2017年FDA已批准两个CAR T分别用于急性淋巴细胞白血病和特定类型非霍奇金淋巴瘤。CAR T对于实体瘤的应用仍受到一定的限制,CAR T治疗过程中存在脱靶效应、胞外段单链抗体结合抗原能力弱及产生免疫原性、利用慢病毒等方法制备CAR T细胞引起的插入突变等问题。因此,选择更特异性的靶标、结合能力更强的抗体,制备安全有效的CAR T细胞是当前急需解决的问题。Endoglin（CD105）是相对分子量为180 k Da的同型二聚体细胞膜糖蛋白,被认为是新生血管内皮细胞的特异标志分子之一,表达于实体肿瘤新生血管及相关肿瘤细胞表面,因此以CD105为靶点构... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：144 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

CD105CART细胞的制备及体内抗肿瘤的示意图

图 2 PX330载体示意图Figure 2 The schematic diagram of the targeting vectors2）使用限制性内切酶 Bbs I 将 pX330 质粒进行酶切，反应体系为：表 2-3 pX330 质粒酶切体系pX330（1μg） 5μl10 ×2.1 Bμffer 5μlBbs I 1μldd H2O 39μlTotal 50μl反应条件为：37℃ 1 小时3）凝胶制备及产物琼脂糖凝胶电泳：称取适当的琼脂糖（LE Agarose）入 1 x TAE，放入微波炉中中高温加热使琼脂粉完全溶解，期间振摇

图 3同源重组载体 Puc-Mdonor-AAVS1-CAR 构建示意图Figure 3 The construction schematic diagram of Puc-Mdonor-AAVS1-受体表达载体制备靶向 CD105 纳米抗体的嵌合抗原受体片段，两ot I 位点，将片段亚克隆至表达载体 p LVX 中，所AR 重组表达载体经 PCR 验证和测序正确后，提取达载体酶切系放置 37度酶切 1 小时，2%的琼脂糖凝胶电泳进酶切产物。表 2-10 载体双酶切体系pLVX，50ng 1 μlEcoRI 1 μl

【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞免疫治疗联合化疗对实体肿瘤疗效的荟萃分析（英文）[J]. Xiao-peng LAN,You-gen CHEN,Zheng WANG,Chuan-wei YUAN,Gang-gang WANG,Guo-liang LU,Shao-wei MAO,Xun-bo JIN,Qing-hua XIA.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2015(09)



本文编号：3454170