DCC-2036靶向AXL-KLF5信号轴抑制三阴性乳腺癌干细胞
发布时间：2021-10-24 13:32
目的:探究新型小分子酪氨酸激酶抑制剂DCC-2036对三阴性乳腺癌干细胞的影响及相关机制,为难治性TNBC的治疗提供潜在的候选药物。方法:1.培养MDA-MD-231、HS-578T细胞系并使其稳定传代;通过流式细胞术检测醛脱氢酶ALDH+干/祖细胞群、微球体培养实验、Western Blot检测干细胞标志物的表达,观察DCC-2036对TNBC细胞系MDA-MB-231、HS-578T的CSCs的抑制作用。2.通过Western Blot观察DCC-2036对TNBC细胞中KLF5及其下游靶基因的抑制作用,并通过转染KLF5质粒探讨KLF5高表达对DCC-2036抑制TNBC干细胞效果的影响,以明确KLF5是否介导DCC-2036对TNBC干细胞的抑制作用。通过q RT-PCR、放线菌酮（CHX）示踪实验、蛋白酶体抑制剂MG132阻断实验等探讨DCC-2036是否通过降低KLF5的蛋白稳定性降低KLF5的表达。通过Western Blot、q RT-PCR等实验观察DCC-2036处理后AXL活性和表达及KLF5的改变,敲低/激活AXL后KLF5及其下游的表达变化,以研究DCC-20...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DCC-2036对TNBC细胞中ALDH+干/祖细胞群表达的影响
183.1.2DCC-2036抑制TNBC干细胞的成球数目与大小通过微球体培养可以富集乳腺癌干细胞。为了进一步验证DCC-2036对TNBC干细胞的抑制作用，我们进行了微球体培养，观察加药处理后微球体形成的变化情况。将TNBC细胞用DCC-2036处理48小时，然后将其铺在24孔超低附着板上。如图1-2所示，在MDA-MB-231细胞中，对照组微球体培养的细胞球数为33.00±1.53，DCC-2036（5μM）干预后的细胞球数为5.00±0.88，在HS-578T细胞中，对照组微球体培养的细胞球数为43.00±3.28，DCC-2036（5μM）干预后的细胞球数为4.00±0.88。DCC-2036显著减少了由两种细胞系形成的微球体的数目和体积。差异均具有统计学意义（P＜0.001）。图1-2DCC-2036对TNBC干细胞的微球体形成的影响注：图A三个独立实验的代表性图，比例尺，100μm；图B为统计图，结果显示为具有平均值±sd的柱状图，n=3个独立实验。统计显著性由Student"st-test确定。***p<0.001。AB
193.1.3DCC-2036抑制TNBC干细胞相关标志物的蛋白表达在MDA-MB-231细胞中，使用不同浓度的DCC-2036（5,10,20μM）处理48小时后，使用蛋白质印迹法测量肿瘤干细胞（CSCs）相关标志物的蛋白质水平。如图1-3所示，不同浓度的DCC-2036对MDA-MB-231细胞中的干细胞相关标志物ALDH1A1、OCT4、KLF4和SOX2的表达具有显著的抑制作用，并且随着DCC-2036浓度的增加，蛋白表达逐渐降低。图1-3不同浓度的DCC-2036抑制TNBC干细胞相关标志物的蛋白表达情况注：与对照组相比，不同浓度的DCC-2036处理后，细胞中ALDH1A1、OCT4、KLF4和SOX的蛋白表达均有明显的差异。实验数据为三次独立重复实验代表图，Actin为内参蛋白。3.2DCC-2036部分通过抑制KLF5抑制TNBC干细胞3.2.1DCC-2036抑制TNBC细胞中KLF5及其下游靶基因蛋白水平的表达文献报道KLF5为基底型乳腺癌的重要干细胞转录因子[21,25]，Nanog[29]和FGF-BP1[18]等都是其下游的靶基因。米非司酮通过下调KLF5抑制TNBC干细胞[21]。那么DCC-2036可否通过下调KLF5的表达而发挥抑制TNBC干细胞的作用呢？我们将MDA-MB-231、HS-578T细胞用不同浓度的DCC-2036处理48小时，
【参考文献】：
期刊论文
[1]Niclosamide,an old antihelminthic agent,demonstrates antitumor activity by blocking multiple signaling pathways of cancer stem cells[J]. Jing-Xuan Pan1,Ke Ding2 and Cheng-Yan Wang1 1 Department of Pathophysiology,Zhongshan School of Medicine,Sun Yat-sen University,Guangzhou,Guangdong 510089,P.R.China;2 Key Laboratory of Regenerative Biology and Institute of Chemical Biology,Guangzhou Institute of Biomedicine and Health,Chinese Academy of Sciences,Guangzhou Science Park,Guangzhou,Guangdong 510089,P.R.China.. 癌症. 2012(04)
[2]γ-Secretase Inhibitor, DAPT Inhibits Self-renewal and Stemness Maintenance of Ovarian Cancer Stem-like Cells In Vitro[J]. Li-yu Jiang, Xiao-lei Zhang, Ping Du, Jian-hua Zheng* Department of Obstetrics and Gynecology, the First Affiliated Hospital, Harbin Medical University, Harbin 150001, China. Chinese Journal of Cancer Research. 2011(02)
本文编号：3455372
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
DCC-2036对TNBC细胞中ALDH+干/祖细胞群表达的影响
183.1.2DCC-2036抑制TNBC干细胞的成球数目与大小通过微球体培养可以富集乳腺癌干细胞。为了进一步验证DCC-2036对TNBC干细胞的抑制作用，我们进行了微球体培养，观察加药处理后微球体形成的变化情况。将TNBC细胞用DCC-2036处理48小时，然后将其铺在24孔超低附着板上。如图1-2所示，在MDA-MB-231细胞中，对照组微球体培养的细胞球数为33.00±1.53，DCC-2036（5μM）干预后的细胞球数为5.00±0.88，在HS-578T细胞中，对照组微球体培养的细胞球数为43.00±3.28，DCC-2036（5μM）干预后的细胞球数为4.00±0.88。DCC-2036显著减少了由两种细胞系形成的微球体的数目和体积。差异均具有统计学意义（P＜0.001）。图1-2DCC-2036对TNBC干细胞的微球体形成的影响注：图A三个独立实验的代表性图，比例尺，100μm；图B为统计图，结果显示为具有平均值±sd的柱状图，n=3个独立实验。统计显著性由Student"st-test确定。***p<0.001。AB
193.1.3DCC-2036抑制TNBC干细胞相关标志物的蛋白表达在MDA-MB-231细胞中，使用不同浓度的DCC-2036（5,10,20μM）处理48小时后，使用蛋白质印迹法测量肿瘤干细胞（CSCs）相关标志物的蛋白质水平。如图1-3所示，不同浓度的DCC-2036对MDA-MB-231细胞中的干细胞相关标志物ALDH1A1、OCT4、KLF4和SOX2的表达具有显著的抑制作用，并且随着DCC-2036浓度的增加，蛋白表达逐渐降低。图1-3不同浓度的DCC-2036抑制TNBC干细胞相关标志物的蛋白表达情况注：与对照组相比，不同浓度的DCC-2036处理后，细胞中ALDH1A1、OCT4、KLF4和SOX的蛋白表达均有明显的差异。实验数据为三次独立重复实验代表图，Actin为内参蛋白。3.2DCC-2036部分通过抑制KLF5抑制TNBC干细胞3.2.1DCC-2036抑制TNBC细胞中KLF5及其下游靶基因蛋白水平的表达文献报道KLF5为基底型乳腺癌的重要干细胞转录因子[21,25]，Nanog[29]和FGF-BP1[18]等都是其下游的靶基因。米非司酮通过下调KLF5抑制TNBC干细胞[21]。那么DCC-2036可否通过下调KLF5的表达而发挥抑制TNBC干细胞的作用呢？我们将MDA-MB-231、HS-578T细胞用不同浓度的DCC-2036处理48小时，
【参考文献】：
期刊论文
[1]Niclosamide,an old antihelminthic agent,demonstrates antitumor activity by blocking multiple signaling pathways of cancer stem cells[J]. Jing-Xuan Pan1,Ke Ding2 and Cheng-Yan Wang1 1 Department of Pathophysiology,Zhongshan School of Medicine,Sun Yat-sen University,Guangzhou,Guangdong 510089,P.R.China;2 Key Laboratory of Regenerative Biology and Institute of Chemical Biology,Guangzhou Institute of Biomedicine and Health,Chinese Academy of Sciences,Guangzhou Science Park,Guangzhou,Guangdong 510089,P.R.China.. 癌症. 2012(04)
[2]γ-Secretase Inhibitor, DAPT Inhibits Self-renewal and Stemness Maintenance of Ovarian Cancer Stem-like Cells In Vitro[J]. Li-yu Jiang, Xiao-lei Zhang, Ping Du, Jian-hua Zheng* Department of Obstetrics and Gynecology, the First Affiliated Hospital, Harbin Medical University, Harbin 150001, China. Chinese Journal of Cancer Research. 2011(02)
本文编号：3455372
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3455372.html
