RhoC shRNA对骨髓瘤RPMI 8226细胞增殖及骨髓瘤移植瘤血管生成的影响
发布时间：2021-10-26 12:34
多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是浆细胞恶性增殖性疾病,发病率在血液系统恶性肿瘤中位居第二位,近年来在我国发病率呈逐年上升趋势。MM发病机制复杂,研究发现血液系统肿瘤的生物学行为同实体肿瘤一样受到血管生成的影响,并且在MM疾病发展过程中,病理性血管生成对MM起促进作用。骨髓瘤血管生成过程中内皮细胞处于核心位置,参与血管腔的改建,新生和稳定等全部过程,是骨髓瘤新生血管扩张的关键因素。研究发现,Rho（Ras homologous）家族成员RhoC,通过调节细胞骨架参与肿瘤血管的形成,对多发性骨髓瘤浸润转移发挥重要作用。前期研究中发现RhoC不仅在MM细胞表达,同样表达于骨髓瘤内皮细胞（multiple myeloma vein endothelial cells,MVECs）和正常人脐静脉内皮细胞（normal human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）中,推测下调 RhoC在MVECs中的表达会减少骨髓瘤血管生成,且RhoC可直接参与MM血管内皮细胞的形态或功能调节。关于下调MM细胞内RhoC表达体内对血管生成的影...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１不同浓度上清诱导的内皮细胞的增殖率??
?第一部分结果???１．?４?ＥＬＩＳＡ法检测ＭＶＥＣｓ内ＶＥＧＦＡ的分泌??ＥＬＩＳＡ结果显示ＭＶＥＣｓ内ＶＥＧＦＡ的表达含量与对照组相比有差异??（尸＜０．０５）（见表?５，图?２）。??表５各组细胞ＥＬＩＳＡ实验ＶＥＧＦＡ浓度结果??组别?无士Ｓ?ｔ值?ｐ值??ＮＣ?９３８．２３?±６５．３９??－３．８９?０．０１＊??Ｓ?１３２１．３８±１８７．３９??（与ＮＣ组相比，＊，户＜０．０５）??ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ?ｏｆ?ＶＥＧＦ－Ａ??２０００－１??氺??１５００－?—Ｉ???＇。１＿?■??ｇｒｏｕｐｓ??图２各组细胞ＥＬＩＳＡ实验ＶＥＧＦＡ浓度结果??２?ＲｈｏＣ?ｓｈＲＮＡ转染ＭＭ血管内皮细胞对ＲＰＭＩ８２２６骨髓??瘤细胞生物学行为的影响??２．?１?ＲｈｏＣ?ｓｈＲＮＡ转染细胞??将上述构建的质粒进行慢病毒载体包装，将包装后的慢病毒载体工作液稀??释为１：?５的浓度进行转染，转染７２?ｈ后，在荧光倒置显微镜下观察各组细胞，??２２??
?第一部分结果???慢病毒载体对ＭＶＥＣｓ和ＨＵＶＥＣｓ的转染（如附图３所示）。??２．?２?条件培养ＲＰＭＩ８２２６细胞??收集ＭＶＥＣｓ的上清液作为条件培养基，采用条件培养基培养ＲＰＭＩ８２２６细??胞４８ｈ后，获得诱导的ＲＰＭＩ８２２６细胞。??２．３?各组ＰＭＩ８２２６细胞中ＲｈｏＣｍＲＮＡ和蛋白表达??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测条件培养ＲＰＭＩ８２２６细胞和对照组培养ＲｈｏＣ蛋白表达，??发现ＭＶＥＣｓ－Ｓ组较ＭＶＥＣｓ－ＮＣ组ＲｈｏＣ蛋白表达含量降低（／？?＜?０．０５），??ＨＵＶＥＣｓ－Ｓ组较ＨＵＶＥＣｓ－ＮＣ组ＲｈｏＣ蛋白表达含量降低（ｐ＜０．０５）（见表６，??图３）。ＰＣＲ检测条件培养骨髓瘤细胞和正常对照组中ＲｈｏＣ?ｍＲＮＡ表达情况，??结果发现经过ＭＶＥＣｓ－Ｓ组较ＭＶＥＣｓ－ＮＣ组ＲｈｏＣ?ｍＲＮＡ表达降低（／？?＜?０．０５）??（图?４）。??表６各组细胞ＲｈｏＣ蛋白相对表达结果（ｎ?＝３）??组别?ＮＣ组（Ｘ?土Ｓ）?Ｓ组（Ｘ士?Ｓ）?尸值??ＭＶＥＣｓ－ｎｃ?１．３６±０．１５?０．０４±０．０２＊?〇．〇〇??ＨＵＶＥＣｓ－ｎｃ?０．９２±０．０８?０．１０±０．０３＊?〇．〇〇??（与ＮＣ组相比，＊，尸＜０．０５）??１．６－．?＊??Ｉ：：?Ｉ?＊??啪?０．６－??Ｓ?０．４－??”ｄ?＿■厂??，?／??图３各组ＲＰＭＩ８２２６细胞ＲｈｏＣ蛋白表达??２３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]自体造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的疗效及影响因素的回顾性分析[J]. 张兵雷,周健,张龚莉,桂瑞瑞,林全德,祖璎玲,喻凤宽,赵慧芳,李珍,王娟,符粤文,张丽娜,周虎,房佰俊,宋永平. 中国实验血液学杂志. 2018(05)
[2]PI3K/AKT信号通路在肿瘤中的研究进展[J]. 施银,冯晓兰,谢李芬,王筱冰. 生命的化学. 2018(03)
[3]模拟体内肿瘤微环境的乳腺癌细胞与脐静脉内皮细胞的体外共培养[J]. 杨艳芳,孟盈盈,叶军,夏学军,李琳,董武军,王洪亮,刘玉玲. 药学学报. 2018(03)
[4]IMWG多发性骨髓瘤诊断标准解读[J]. 朱婉秋,陈文明. 临床血液学杂志. 2017(04)
[5]多发性骨髓瘤治疗新进展[J]. 武贤达,孙丽霞,吕鸿雁,张金巧. 临床荟萃. 2017(07)
[6]ACE2/Ang-（1-7） signaling and vascular remodeling[J]. ZHANG ZhenZhou,CHEN LaiJiang,ZHONG JiuChang,GAO PingJin,OUDIT Gavin Y.. Science China（Life Sciences）. 2014(08)
[7]聚焦多发性骨髓瘤[J]. 史志祥,陈菁. 药学进展. 2014(01)
[8]人多发性骨髓瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立[J]. 林美桂,梁碧容,古月瑜,颜绵生,李婕,莫穗林. 深圳中西医结合杂志. 2012(05)
[9]诱导正常血管内皮细胞具备肿瘤血管特性的研究[J]. 向邦德,吕明德,黄洁夫,汤庆. 中山大学学报(医学科学版). 2005(03)
本文编号：3459512
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１不同浓度上清诱导的内皮细胞的增殖率??
?第一部分结果???１．?４?ＥＬＩＳＡ法检测ＭＶＥＣｓ内ＶＥＧＦＡ的分泌??ＥＬＩＳＡ结果显示ＭＶＥＣｓ内ＶＥＧＦＡ的表达含量与对照组相比有差异??（尸＜０．０５）（见表?５，图?２）。??表５各组细胞ＥＬＩＳＡ实验ＶＥＧＦＡ浓度结果??组别?无士Ｓ?ｔ值?ｐ值??ＮＣ?９３８．２３?±６５．３９??－３．８９?０．０１＊??Ｓ?１３２１．３８±１８７．３９??（与ＮＣ组相比，＊，户＜０．０５）??ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ?ｏｆ?ＶＥＧＦ－Ａ??２０００－１??氺??１５００－?—Ｉ???＇。１＿?■??ｇｒｏｕｐｓ??图２各组细胞ＥＬＩＳＡ实验ＶＥＧＦＡ浓度结果??２?ＲｈｏＣ?ｓｈＲＮＡ转染ＭＭ血管内皮细胞对ＲＰＭＩ８２２６骨髓??瘤细胞生物学行为的影响??２．?１?ＲｈｏＣ?ｓｈＲＮＡ转染细胞??将上述构建的质粒进行慢病毒载体包装，将包装后的慢病毒载体工作液稀??释为１：?５的浓度进行转染，转染７２?ｈ后，在荧光倒置显微镜下观察各组细胞，??２２??
?第一部分结果???慢病毒载体对ＭＶＥＣｓ和ＨＵＶＥＣｓ的转染（如附图３所示）。??２．?２?条件培养ＲＰＭＩ８２２６细胞??收集ＭＶＥＣｓ的上清液作为条件培养基，采用条件培养基培养ＲＰＭＩ８２２６细??胞４８ｈ后，获得诱导的ＲＰＭＩ８２２６细胞。??２．３?各组ＰＭＩ８２２６细胞中ＲｈｏＣｍＲＮＡ和蛋白表达??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测条件培养ＲＰＭＩ８２２６细胞和对照组培养ＲｈｏＣ蛋白表达，??发现ＭＶＥＣｓ－Ｓ组较ＭＶＥＣｓ－ＮＣ组ＲｈｏＣ蛋白表达含量降低（／？?＜?０．０５），??ＨＵＶＥＣｓ－Ｓ组较ＨＵＶＥＣｓ－ＮＣ组ＲｈｏＣ蛋白表达含量降低（ｐ＜０．０５）（见表６，??图３）。ＰＣＲ检测条件培养骨髓瘤细胞和正常对照组中ＲｈｏＣ?ｍＲＮＡ表达情况，??结果发现经过ＭＶＥＣｓ－Ｓ组较ＭＶＥＣｓ－ＮＣ组ＲｈｏＣ?ｍＲＮＡ表达降低（／？?＜?０．０５）??（图?４）。??表６各组细胞ＲｈｏＣ蛋白相对表达结果（ｎ?＝３）??组别?ＮＣ组（Ｘ?土Ｓ）?Ｓ组（Ｘ士?Ｓ）?尸值??ＭＶＥＣｓ－ｎｃ?１．３６±０．１５?０．０４±０．０２＊?〇．〇〇??ＨＵＶＥＣｓ－ｎｃ?０．９２±０．０８?０．１０±０．０３＊?〇．〇〇??（与ＮＣ组相比，＊，尸＜０．０５）??１．６－．?＊??Ｉ：：?Ｉ?＊??啪?０．６－??Ｓ?０．４－??”ｄ?＿■厂??，?／??图３各组ＲＰＭＩ８２２６细胞ＲｈｏＣ蛋白表达??２３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]自体造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的疗效及影响因素的回顾性分析[J]. 张兵雷,周健,张龚莉,桂瑞瑞,林全德,祖璎玲,喻凤宽,赵慧芳,李珍,王娟,符粤文,张丽娜,周虎,房佰俊,宋永平. 中国实验血液学杂志. 2018(05)
[2]PI3K/AKT信号通路在肿瘤中的研究进展[J]. 施银,冯晓兰,谢李芬,王筱冰. 生命的化学. 2018(03)
[3]模拟体内肿瘤微环境的乳腺癌细胞与脐静脉内皮细胞的体外共培养[J]. 杨艳芳,孟盈盈,叶军,夏学军,李琳,董武军,王洪亮,刘玉玲. 药学学报. 2018(03)
[4]IMWG多发性骨髓瘤诊断标准解读[J]. 朱婉秋,陈文明. 临床血液学杂志. 2017(04)
[5]多发性骨髓瘤治疗新进展[J]. 武贤达,孙丽霞,吕鸿雁,张金巧. 临床荟萃. 2017(07)
[6]ACE2/Ang-（1-7） signaling and vascular remodeling[J]. ZHANG ZhenZhou,CHEN LaiJiang,ZHONG JiuChang,GAO PingJin,OUDIT Gavin Y.. Science China（Life Sciences）. 2014(08)
[7]聚焦多发性骨髓瘤[J]. 史志祥,陈菁. 药学进展. 2014(01)
[8]人多发性骨髓瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立[J]. 林美桂,梁碧容,古月瑜,颜绵生,李婕,莫穗林. 深圳中西医结合杂志. 2012(05)
[9]诱导正常血管内皮细胞具备肿瘤血管特性的研究[J]. 向邦德,吕明德,黄洁夫,汤庆. 中山大学学报(医学科学版). 2005(03)
本文编号：3459512
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