TMEM16A钙激活氯离子通道在结直肠癌细胞增殖和迁移中的作用

发布时间：2021-10-27 20:00

　　TMEM16A（又称ANO1）是一种钙激活氯离子通道,属于TMEM16膜蛋白家族,具有10个跨膜结构域。TMEM16A在多种上皮细胞、平滑肌细胞、心肌细胞、神经元等中广泛表达,具有多种重要的功能,如调节分泌上皮细胞分泌液体,平滑肌收缩,神经和心肌的兴奋等。其功能障碍与癌症、胃肠道疾病、高血压以及囊性纤维化等许多疾病相关。近年来,研究发现在多种癌症中,如乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌、前列腺癌等,TMEM16A表达上调,参与调控癌细胞的增殖和迁移。结直肠癌为恶性肿瘤,严重危害人类健康。研究发现TMEM16A在结直肠癌细胞中有表达,其表达可能与结直肠癌的发生与进展相关,因此TMEM16A可以作为研究结直肠癌进展的靶点。在本研究中,利用qPCR、Western blot和免疫细胞化学的方法,检测了人正常肠上皮细胞NCM460、人结直肠腺癌细胞SW480、SW620中TMEM16A的表达。使用TMEM16A抑制剂T16Ainh-A01、Ca CCinh-A01、木犀草素（Luteolin）和TMEM16A激活剂剂Eact、离子霉素（Ionomycin）药,利用CCK-8法检测细胞的增殖,流式细胞术检... 

【文章来源】：辽宁师范大学辽宁省

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 钙激活氯离子通道
    1.2 TMEM16A的发现
    1.3 TMEM16A的生理功能
        1.3.1 上皮细胞液体转运
        1.3.2 平滑肌收缩
        1.3.3 神经兴奋与疼痛感受
    1.4 TMEM16A与癌症
        1.4.1 TMEM16A在癌症中的表达
        1.4.2 TMEM16A与癌细胞的增殖、凋亡
        1.4.3 TMEM16A与癌细胞的迁移、侵袭
        1.4.4 TMEM16A与蛋白质的相互作用
    1.5 TMEM16A与结直肠癌
        1.5.1 结直肠癌
        1.5.2 诱发结直肠癌的主要因素
        1.5.3 TMEM16A在结直肠癌中的表达
        1.5.4 TMEM16A对结直肠癌的影响
    1.6 TMEM16A与信号通路
        1.6.1 MAPK信号通路
        1.6.2 PI3K/AKT/m TOR信号通路
        1.6.3 NF-κB信号通路
    1.7 TMEM16A通道活性对肿瘤细胞的影响
    1.8 本研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验仪器
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 实验细胞
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 实时定量荧光PCR实验
        2.2.3 免疫蛋白印迹实验
        2.2.4 细胞活力实验
        2.2.5 细胞增殖实验
        2.2.6 免疫细胞化学
        2.2.7 细胞划痕实验
        2.2.8 细胞迁移实验
        2.2.9 细胞周期实验
        2.2.10 细胞凋亡实验
        2.2.11 数据统计分析
3 结果与分析
    3.1 TMEM16A在结直肠癌细胞中表达上调
        3.1.1 TMEM16A在结直肠癌细胞中的m RNA表达分析
        3.1.2 TMEM16A在结直肠癌细胞中的蛋白表达分析
        3.1.3 免疫细胞化学法检测TMEM16A在结直肠癌细胞中的表达
    3.2 TMEM16A钙激活氯离子通道对结直肠癌细胞增殖的影响
        3.2.1 CCK-8法测定结直肠癌细胞的增殖
        3.2.2 TMEM16A通道活性对结直肠癌细胞活力的影响
        3.2.3 抑制TMEM16A通道活性对结直肠癌细胞增殖的影响
        3.2.4 激活TMEM16A通道活性对结直肠癌细胞增殖的影响
    3.3 TMEM16A钙激活氯离子通道对结直肠癌细胞有丝分裂的影响
        3.3.1 抑制TMEM16A通道活性对结直肠癌细胞周期的影响
        3.3.2 激活TMEM16A通道活性对结直肠癌细胞周期的影响
    3.4 Hoechst33258 荧光染色法观察结直肠癌细胞核固缩和染色质片断化
    3.5 TMEM16A钙激活氯离子通道对结直肠癌细胞迁移的影响
        3.5.1 抑制TMEM16A通道活性对结直肠癌细胞迁移的影响
        3.5.2 激活TMEM16A通道活性对结直肠癌细胞迁移的影响
        3.5.3 Transwell细胞迁移分析结果
        3.5.4 结直肠癌细胞中波形蛋白表达上调
4 讨论
    4.1 TMEM16A在结直肠癌细胞中表达上调
    4.2 TMEM16A通道活性与结直肠癌细胞的增殖
    4.3 TMEM16A通道活性与结直肠癌细胞的迁移
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]人大肠癌细胞株SW620/SW480转移相关蛋白及机制研究[J]. 蔡未央,张燕捷.  现代肿瘤医学. 2019(15)
[2]组织蛋白酶D、Tmem 16a和乳腺肿瘤激酶在结肠癌中的表达及意义[J]. 陈曦,孙海斌.  中国老年学杂志. 2014(07)
[3]鞣酸通过下调TMEM16A的表达抑制人结肠癌细胞SW620细胞的增殖[J]. 李尚坤,傅仲学,文坤明,吴星烨.  重庆医学. 2014(01)
[4]TMEM16A在结肠癌组织中的表达及其意义[J]. 杨军,刘妮,康安静,赵世平,黄晓钟,苏宝山,陈晓黎,李宗芳.  世界华人消化杂志. 2012(35)

博士论文
[1]TNFα介导钙离子内流促进肝癌细胞凋亡的作用及机制研究[D]. 朱剑军.中国人民解放军空军军医大学 2018



本文编号：3462235