二氯乙酸抑制人肾癌细胞株A498增殖、侵袭及迁移的实验研究

发布时间：2021-10-30 12:14

　　背景与目的:肾细胞癌（renal cell carcinoma,Rcc）,是肾实质恶性肿瘤最常见类型之一,肾小管上皮细胞为其细胞来源。肾癌病因复杂,目前已知的有吸烟、药物、病毒及重金属镉等,其中,吸烟是其已知的明确的独立危险因素之一。本课题通过体外细胞实验探讨二氯乙酸（DCA）对人肾癌细胞株A498增殖、侵袭及迁移的影响,并分析其机制。方法:将人肾癌细胞株A498以RPMI 1640培养液培养,分为阴性对照（NC）组、阳性对照（PC）组、DCA低剂量、中剂量、高剂量组。DCA3剂量组分别予以5、10、20 mmol/L DCA,NC组予以等容积无菌生理盐水,PC组予以5-氟尿嘧啶5mg/L,培养48 h。四唑盐比色法（MTT）检测24h、48h后增殖抑制率;Transwell小室实验检测侵袭能力;细胞划痕实验检测迁移能力;实时荧光定量聚合酶链反应（q RT-PCR）检测Snail、Slug、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin基因表达;免疫印迹法（WB）检测上述蛋白表达。结果:NC组48 h和24 h增殖抑制率相近（P>0.05）,余4组均显著升高（P&l... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

采用MTT法检测人肾癌细胞株A498培养24h、48h后增殖抑制率

安徽医科大学硕士学位论文19图2：DCA处理后A498细胞株侵袭活性改变（Transwell小室实验）。A：NC组；B：PC组；C：DCA低剂量组；D：DCA中剂量组；E：DCA高剂量组。DCA处理后降低A498细胞侵袭能力，DCA处理后，穿过Transwell小室基质胶的细胞数目明显减少。3.3迁移能力对比细胞划痕实验检测各组迁移能力变化，于48h后在倒置相差显微镜下观察，细胞迁移率=（1-愈合后间距/起始间距）×100%。各组迁移率对比差异有统计学意义（P＜0.05），每2组对比DCA高剂量组＜DCA中剂量组/PC组＜DCA低剂量组＜NC组，除DCA中剂量组与PC组差异无统计学意义（P＞0.05），余每2组间对比差异均有统计学意义（P＜0.05），表明DCA可降低人肾癌细胞株A498的迁移能力，且存在剂量依赖性。见图3。图3：DCA处理后A498细胞株迁移能力变化（划痕实验）。A：NC组；B：PC

安徽医科大学硕士学位论文22图5：DCA处理引起上皮间质标志物蛋白水平的变化。A：NC组；B：PC组；C：DCA低剂量组；D：DCA中剂量组；E：DCA高剂量组。表现为E-cadherin蛋白含量减少及Snail、Slug、、N-cadherin、Vimentin蛋白含量的增加，且存在剂量依赖性，β-actin为内参。4.讨论目前关于肾癌的发病机制研究尚少，人们对其认识也尚浅。关于该病病因报道[22-24]，大致可分为遗传因素、精神因素、化学致癌物质接触、不良生活习惯等几类，但仍需进一步研究[25]。由于目前人们对该病的病因病机认识少，且肾癌细胞增殖、侵袭和迁移的能力强，临床治疗难度大，因而目前尚缺乏行之有效的抗肾癌治疗方案。5-氟尿嘧啶是肾癌患者目前常用的化疗药物，在体外细胞实验和临床试验中均证实该药物有一定的治疗效果[26-27]，但肾癌患者的预后仍较差，且远期生存率低，仍需探讨高效的用药方案及其可能的作用机制，为临床抗肾癌用药的研究奠定基矗本研究增殖抑制率对比结果显示，NC组24h、48h均处于高水平，其余4组均有所下降，且DCA高剂量组均最低，DCA中剂量组和PC组均稍高，DCA低剂


本文编号：3466714