鸡血藤总黄酮类物质对肝细胞癌凋亡调控作用机制研究

发布时间：2021-11-01 04:41

　　[目的]原发性肝癌是目前世界上最为流行的恶性肿瘤之一,其具有早期不易发现、晚期病死率高的特点。近年来我国在肝细胞癌的诊疗上不断取得巨大的进展。但由于我国人口基数大,具有相当数目的HBV\HCV感染或携带者,肝癌仍将是我国癌症预防与诊疗的重中之重。因此,探寻与肝细胞癌凋亡发生发展相关的作用机制是至关重要的问题。本课题旨在初步探求豆科植物鸡血藤茎干提取物总黄酮对两种经典肝癌细胞株凋亡调控的作用机制,可望提供一个新的caspase-9的作用途径,从而调控肝癌细胞的凋亡机制。[方法]1.细胞毒性检测。在HepG2细胞和HL7702细胞系中,不同药物浓度处理细胞48h后行CCK8,测定其IC50值。2.细胞形态学检查:HepG2和HL-7702细胞,不同浓度中药处理48h后,DAPI染色,室温1Omin,PBS清洗,荧光显微镜拍照。3.设定半抑制率的药物浓度为最高浓度（如10ug/ml）,设定低两个浓度（如5ug/ml,1ug/ml）,以及空白Blank组,即每种细胞有4个组。作用481h后DAPI染色及拍照。4.上述4组,进行流式检测凋亡（AnnexinV-FITC/PI）。比较不同浓度药物处... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．鸡血藤外提取物干预ＨＬ７７０２细胞ＤＡＰＩ核染荧光涂片（ｘｌ〇）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?ＤＡＰＩ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｄｙｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｓｍｅａｒ?ｆｏｒ?ｆｏｒｅｉｇｎ?ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ?ＨＬ７７０２?ｃｅｌｌ?ｅｘｔｒａｃｔ?ｏｆ??Ｃａｕｌｉｓ?Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｉ?（ｘｌ〇）??

图３．鸡血藤外提取物干预ＨＬ７７０２细胞ＤＡＰＩ核染荧光涂片（ｘ４０）??Ｆｉｇｕｒｅ３．?ＤＡＰＩ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｄｙｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｓｍｅａｒ?ｆｏｒ?ｆｏｒｅｉｇｎ?ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ?ＨＬ７７０２?ｃｅｌｌ?ｅｘｔｒａｃｔ?ｏｆ??Ｃａｕｌｉｓ?Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｉ?（ｘ４０）??鸡血藤外提取干预４８小时后：Ａ为空白对照组ＨＬ７７０２细胞ＤＡＰＩ核染情况，Ｂ图为５ｕｇ／ｍｌ鸡血藤外??提取物干预ＨＬ７７０２细胞ＤＡＰＩ核染情况，Ｃ图为１０ｕｇ／ｍｌ鸡血藤外提取物干预ＨＬ７７０２细胞ＤＡＰＩ核染情??况，Ｄ图为１７ｕｇ／ｍｌ鸡血藤外提取物干预ＨＬ７７０２细胞ＤＡＰＩ核染情况。可见在不同浓度鸡血藤外提取物的??作用下，ＨＬ７７０２细胞核均呈现核形完整，染色质均匀状态；但随着用药浓度增加，极少数染色质向外周聚??集，形成周边化。??

图４．鸡血藤外提取物千预ＨｅｐＧ２细胞ＤＡＰＩ核染荧光涂片（ｘｌ〇）??Ｆｉｇｕｒｅ?４．?ＤＡＰＩ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｄｙｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｓｍｅａｒ?ｆｏｒ?ｆｏｒｅｉｇｎ?ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ?ＨｅｐＧ２?ｃｅｌｌ?ｅｘｔｒａｃｔ?ｏＣａｕｌｉｓ?Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｉ?（ｘ１０）??鸡血藤外提取干预４８小时后：Ｅ为空白对照组ＨｅｐＧ２细胞ＤＡＰＩ核染情况，Ｆ图为５ｕｇ／ｍｌ鸡提取物干预ＨｅｐＧ２细胞ＤＡＰＩ核染情况，Ｇ图为１０ｕｇ／ｍｌ鸡血藤外提取物千预ＨｅｐＧ２细胞ＤＡＰＩ核Ｈ图为１７ｕｇ／ｍｌ鸡血藤外提取物干预ＨｅｐＧ２细胞ＤＡＰＩ核染情况。可见与对照组相比，其它三组明显可见??细胞核固缩，偶见细胞核呈波纹状或折缝状（图Ｆ）；部分细胞核染色质呈高度凝集、边缘化（图Ｇ）；（图??Ｈ）中还可见到明显的细胞核裂解后的碎块，并看到凋亡小体的存在。??

【参考文献】：
期刊论文
[1]《中华人民共和国药典》(一部)中石斛药材的演变[J]. 戴忠华,笪舫芳,朱华,樊柳园,秦丽.  中华中医药学刊. 2017(02)
[2]植物总黄酮抗肿瘤作用机制研究进展[J]. 陈凯,陈钱,黄成然,林峰,庞苗苗,姜婷云,沈楠.  吉林医药学院学报. 2015(04)
[3]鸡血藤抗肿瘤作用研究现状[J]. 南楠,张甘霖,王笑民.  中华中医药杂志. 2014(08)
[4]世界癌症报告 中国新增病例全球第一[J].   临床合理用药杂志. 2014(09)
[5]鸡血藤黄酮类提取物SSCE安全性及抗肿瘤作用的研究[J]. 南楠,张甘霖,于明薇,曹可心,马丛,张怡,杨国旺,王笑民.  辽宁中医杂志. 2014(03)
[6]构树叶总黄酮对人肝癌HepG-2细胞增殖及其细胞周期的影响[J]. 朱开梅,李美波,骆彩珍,刘建楠,顾生玖.  中国实验方剂学杂志. 2014(03)
[7]荞麦花叶总黄酮体外抗肿瘤及促细胞凋亡作用研究[J]. 郭兰,赵志宇,韩淑英.  中药药理与临床. 2013(06)
[8]珍珠菜总黄酮对白血病HL-60细胞裸鼠移植瘤的抑制作用[J]. 杨能,龙林梅,张庆青,唐丽华,梁中琴.  江苏医药. 2013(10)
[9]Caspase家族与细胞凋亡及诱发因素研究进展[J]. 郭海,才秀莲.  河南职工医学院学报. 2012(06)
[10]鸡血藤黄酮类有效部位通过CKI途径对人肺腺癌细胞A549细胞周期的影响[J]. 杨国旺,高珊,富琦,李萍,罗晓琴,王燕,林燕,王笑民.  中华中医药杂志. 2012(12)

博士论文
[1]Caspase-3蛋白在重离子辐照肺癌细胞中的功能研究[D]. 徐华.兰州大学 2012
[2]中药鸡血藤质量控制与体内代谢研究[D]. 唐任能.长春中医药大学 2011

硕士论文
[1]鸡血藤抗肿瘤活性成分的分离纯化与结构鉴定[D]. 冯雪娇.北京工商大学 2009
[2]中药鸡血藤的化学成分和质量控制方法研究[D]. 李莹.沈阳药科大学 2009
[3]鸡血藤化学成分研究[D]. 王亚莉.广东工业大学 2004



本文编号：3469513