Sp2调控TRIB3促进肝癌侵袭转移及其相关机制研究
发布时间：2021-11-14 07:20
研究背景原发性肝癌（HCC）是临床上最常见的恶性肿瘤之一,发病率及死亡率在所有恶性肿瘤中均位居前列。由于起病隐匿,高度侵袭性及易出现转移,确诊时绝大部分患者已经属于晚期,失去根治性切除的时机。尽管近年来原发性肝癌治疗手段有一定程度的进展,但其长期生存仍不能令人满意。因此深入探究原发性肝癌侵袭转移背后的分子基础至关重要。大量研究表明,持续活化的内质网应激（ERS）与肿瘤的发生发展密切相关,内质网应激状态下,三种跨膜蛋白必需肌醇1α（IRE1α）,蛋白激酶RNA样内质网激酶（PERK）和活化转录因子-6（ATF6）激活未折叠蛋白反应（UPR）的三条通路。其不仅可以通过修复损伤蛋白质或降解错误折叠蛋白,保护肿瘤细胞避免机体杀伤,还可调控肿瘤细胞的生长,通过多种途径促进肿瘤侵袭转移,介导化疗耐药。在长期持续严重的内质网应激作用下,甚至可以诱导肿瘤细胞的凋亡。在内质网应激状态下,TRIB3作为细胞应激的传感器表达上调。TRIB3是哺乳动物伪激酶tribbles家族的成员之一,在未折叠蛋白反应中起着关键作用,它参与肿瘤的进展,并与预后不良有关。转录因子Sp2（transcription facto...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Sp2在肝癌组织中高表达A-B.免疫组化检测Sp2在肝癌组织中过表达，在
安徽医科大学硕士学位论文31Fig2.Sp2overexpressionisassociatedwithclinicalstagingandpoorprognosis图2Sp2过表达与肿瘤分期及不良预后有关A.Sp2表达与肿瘤TNM分期相关；B.Sp2高、低表达患者的KaplanMeier生存曲线；C.TCGA数据显示Sp2在正常组织和肝癌组织中分别呈低表达和高表达；D.TCGA数据显示不同Sp2表达水平(高、低表达)肝癌患者的KaplanMeier生存曲线。3.2Sp2敲低抑制肝癌细胞增殖、侵袭，并促进细胞凋亡3.2.1WesternBlot检测三种肝癌细胞系中Sp2表达水平为了进一步明确Sp2在肝癌中的作用，我们选取相应肝癌细胞株进行体外实验。采用WesternBlot方法检测HepG2，Huh7，Hep3B三种细胞系中Sp2蛋白表达水平，结果见图3。最终选用表达相对较高的HepG2和Huh7两种细胞系进行后续研究。
安徽医科大学硕士学位论文33Fig4.EffectofSp2knockdownoncellproliferationinHepG2andHuh7cells图4敲除Sp2对肝癌细胞增殖能力的影响A.WesternBlot实验检测瞬时转染后HepG2细胞si-NC组和si-Sp2组别Sp2蛋白表达差异和统计图；B.WesternBlot实验检测Huh7细胞si-NC组和si-Sp2组别Sp2蛋白表达差异和统计图；C.CCK8实验和克隆形成实验检测HepG2细胞si-NC组和si-Sp2组细胞增殖能力差异和统计图；D.CCK8和克隆形成实验分别检测Huh7细胞si-NC组和si-Sp2组细胞增殖能力差异和统计图3.2.3Sp2敲低可降低肝癌细胞迁徙及侵袭能力在HepG2和Huh7两种细胞系中，我们运用划痕实验、Transwell实验检测细胞迁徙及侵袭能力的变化。划痕实验表明，划痕创建24小时后，对照组(si-NC)肝癌细胞迁徙范围较Sp2转染组（si-Sp2）明显扩大，提示Sp2敲除可以抑制肝癌细胞迁徙能力（图5A-B）。而Tanswell迁徙实验表明，Sp2转染组（si-Sp2）迁徙细胞比率较对照组（si-NC）明显降低，再次证实了如上结论。同时，我们进行了Tanswell
【参考文献】：
期刊论文
[1]Sp基因与Wnt基因对胚胎发育异常及唇腭裂的影响[J]. 程忠委,宋庆高. 口腔疾病防治. 2019(06)
[2]转录因子Sp3在肝细胞癌中的表达意义[J]. 莫伟嘉,李佳,陆会平,冯振博. 重庆医学. 2016(03)
[3]转录因子Sp3表达与胰腺癌临床病理特征及预后的关系[J]. 李翀,唐纯娜. 中国现代医学杂志. 2015(18)
[4]Sp3对β-catenin基因转录调控作用初探[J]. 黄兰姗,黄子凌,冯振博,陈罡,危丹明. 中国病理生理杂志. 2014(11)
[5]Sp2对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及Cyclin D1的表达变化[J]. 袁渊,郑鹏生,周敏,姚安梅,王静. 西安交通大学学报(医学版). 2014(04)
[6]Sp样转录因子家族在神经系统发育与疾病中的研究进展[J]. 吴俊,张雪梅,贺旭,付锦. 脑与神经疾病杂志. 2014(02)
[7]Sp1/Krüppel样因子的研究进展[J]. 熊倩,阮修艳,方向东. 遗传. 2010(06)
本文编号：3494201
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Sp2在肝癌组织中高表达A-B.免疫组化检测Sp2在肝癌组织中过表达，在
安徽医科大学硕士学位论文31Fig2.Sp2overexpressionisassociatedwithclinicalstagingandpoorprognosis图2Sp2过表达与肿瘤分期及不良预后有关A.Sp2表达与肿瘤TNM分期相关；B.Sp2高、低表达患者的KaplanMeier生存曲线；C.TCGA数据显示Sp2在正常组织和肝癌组织中分别呈低表达和高表达；D.TCGA数据显示不同Sp2表达水平(高、低表达)肝癌患者的KaplanMeier生存曲线。3.2Sp2敲低抑制肝癌细胞增殖、侵袭，并促进细胞凋亡3.2.1WesternBlot检测三种肝癌细胞系中Sp2表达水平为了进一步明确Sp2在肝癌中的作用，我们选取相应肝癌细胞株进行体外实验。采用WesternBlot方法检测HepG2，Huh7，Hep3B三种细胞系中Sp2蛋白表达水平，结果见图3。最终选用表达相对较高的HepG2和Huh7两种细胞系进行后续研究。
安徽医科大学硕士学位论文33Fig4.EffectofSp2knockdownoncellproliferationinHepG2andHuh7cells图4敲除Sp2对肝癌细胞增殖能力的影响A.WesternBlot实验检测瞬时转染后HepG2细胞si-NC组和si-Sp2组别Sp2蛋白表达差异和统计图；B.WesternBlot实验检测Huh7细胞si-NC组和si-Sp2组别Sp2蛋白表达差异和统计图；C.CCK8实验和克隆形成实验检测HepG2细胞si-NC组和si-Sp2组细胞增殖能力差异和统计图；D.CCK8和克隆形成实验分别检测Huh7细胞si-NC组和si-Sp2组细胞增殖能力差异和统计图3.2.3Sp2敲低可降低肝癌细胞迁徙及侵袭能力在HepG2和Huh7两种细胞系中，我们运用划痕实验、Transwell实验检测细胞迁徙及侵袭能力的变化。划痕实验表明，划痕创建24小时后，对照组(si-NC)肝癌细胞迁徙范围较Sp2转染组（si-Sp2）明显扩大，提示Sp2敲除可以抑制肝癌细胞迁徙能力（图5A-B）。而Tanswell迁徙实验表明，Sp2转染组（si-Sp2）迁徙细胞比率较对照组（si-NC）明显降低，再次证实了如上结论。同时，我们进行了Tanswell
【参考文献】：
期刊论文
[1]Sp基因与Wnt基因对胚胎发育异常及唇腭裂的影响[J]. 程忠委,宋庆高. 口腔疾病防治. 2019(06)
[2]转录因子Sp3在肝细胞癌中的表达意义[J]. 莫伟嘉,李佳,陆会平,冯振博. 重庆医学. 2016(03)
[3]转录因子Sp3表达与胰腺癌临床病理特征及预后的关系[J]. 李翀,唐纯娜. 中国现代医学杂志. 2015(18)
[4]Sp3对β-catenin基因转录调控作用初探[J]. 黄兰姗,黄子凌,冯振博,陈罡,危丹明. 中国病理生理杂志. 2014(11)
[5]Sp2对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及Cyclin D1的表达变化[J]. 袁渊,郑鹏生,周敏,姚安梅,王静. 西安交通大学学报(医学版). 2014(04)
[6]Sp样转录因子家族在神经系统发育与疾病中的研究进展[J]. 吴俊,张雪梅,贺旭,付锦. 脑与神经疾病杂志. 2014(02)
[7]Sp1/Krüppel样因子的研究进展[J]. 熊倩,阮修艳,方向东. 遗传. 2010(06)
本文编号：3494201
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