抑制TLR4信号通路对小鼠肝脏原位种植瘤的影响

发布时间：2021-11-15 04:29

　　[目的]通过构建TLR4基因沉默SiRNA慢病毒载体,并转染小鼠肝癌H22细胞,传代培养H22细胞,构建小鼠肝癌原位种植瘤模型,观察小鼠肝脏种植瘤体积,应用western blotting和免疫组化检测TLR4蛋白分子,MyD88蛋白分子,NF-κB蛋白分子,TRAM蛋白分子的表达情况,评价RNAi沉默TLR4信号通路的慢病毒转染H22肝癌细胞对小鼠肝脏原位种植瘤和通路关键分子表达的影响,进而研究抑制TLR4信号通路对小鼠肝脏原位种植瘤的影响。[方法]（一）:H22细胞的培养与传代:（1）体外传代培养:课题前期已完成构建TLR4基因沉默SiRNA慢病毒载体及转染小鼠肝癌H22细胞。取出冻存在液氮罐中的肝癌H22细胞,在水浴锅中快速解冻,加入DMEM培养基,离心弃上清液,转移到培养瓶,放入恒温培养箱中进行培养。观察细胞的生长,隔天进行换液。传代培养H22肿瘤细胞数远大于1×107。（2）体内传代培养:离心收集处于对数期的H22肿瘤细胞,用生理盐水洗涤后,接种于小鼠体内,腹水大量形成后,提取H22肝癌细胞重复操作,如此腹水传代3次后,收集小鼠H22肝癌细胞,用生理盐水洗涤后备用。（二）构建... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１用微量注射器向小鼠肝左叶注入Ｈ２２肿瘤细胞??３模型观察及细胞病理学检测??３．?１模型观察??

图３?Ｈ２２空载体组普通显微镜下观察（２００?Ｘ?）??

１．１?Ｈ２２肝癌细胞体外传代培养普通显微镜下观察??普通显微镜下观察Ｈ２２肝癌细胞的状态，可见细胞形态圆润饱满，大小均一，折??光度好（如图２，?３，?４）。??ＨＨ??图２?Ｈ２２未转染组普通显微镜下观察（２００?Ｘ?）??ＷＢＨＵＢＵｍ??ＢｍｍＨｉ??图３?Ｈ２２空载体组普通显微镜下观察（２００?Ｘ?）??２４??

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硕士论文
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本文编号：3496033