PI3K/AKT/p53通路对肺腺癌细胞低剂量放射超敏感性影响的研究
发布时间：2021-11-17 12:32
[目的]低剂量辐射下PI3K/AKT/p53通路对A549和XWLC-05细胞放射超敏感性、细胞凋亡及相关基因、蛋白表达的影响。[方法]1、查找Genbank中wt-p53基因的序列,设计相应引物,构建野生型p53（wt-p53）慢病毒载体,将慢病毒载体及空载体转染入XWLC-05和A549细胞中。2、用DNA损伤剂阿霉素培养细胞24小时,荧光定量PCR和western-bloting判断p53的表达情况和功能状态。3、用50 μmol/L LY294002选择性抑制剂处理培养XWLC-05和A549细胞24小时,western-bloting检测PI3K/AKT通路抑制情况,以PI3K下游AKT和磷酸化AKT的蛋白表示。4、以不同剂量 x 线（0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0Gy）分别照射 LY294002处理组、野生型p53转染组以及LY294002处理+野生型p53转染组细胞。克隆形成实验看各组细胞的的存活情况,并拟合出细胞存活曲线,比较两种细胞之间的HRS差异性。5、以部分x线（0、0.2、0.5、1.0Gy）照射LY294002处理组、野生型p53...
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２?ＸＷＬＣ－０５细胞转染野生型ｐ５３基因７２小时荧光显微镜下观察（１０ｘ）??２、导入的外源性野生型Ｐ５３基因表达情况及功能状态：??
间ＡＫＴ的表达基本无变化，以总ＡＫＴ蛋白作为内参照，力卩药组ＸＷＬＣ－０５细胞的??ｐＡＫＴ３８０?（＃＃ｐ＜０．０５），ｐＡＫＴ４７３?（＊＊尸＜０．０５）蛋白表达明显下降，加药组?Ａ５４９??细胞的?Ｐ－ＡＫＴ３８０?（＃ｐ＜０＿０５），ｐ－ＡＫＴ４７３（＊；５＜０．０５）蛋白表达也明显下降（图?４／５），??在同一浓度的抑制剂下ＸＷＬＣ－０５细胞没有Ａ５４９细胞的抑制效果好。??１２?３?１??Ａｋｔ??ｐ－Ａｋｔ４７３?ｍｍｍｍ??ｐ－Ａｋｔ?３０８??图４加ＬＹ２９４００２抑制剂前后Ａ５４９细胞和ＸＷＬＣ－０５细胞抑制ＰＩ３Ｋ情况??注：１－４?分别为?Ａ５４９?细胞，Ａ５４９＋ＬＹ２９４００２?细胞，ＸＷＬＣ－０５?细胞，??ＸＷＬＣ－０５＋ＬＹ２９４００２?细胞。??＊?＃＃??ｏ．８ｌ?１?１?０８１?＃?，＿，??４??＿Ｔ?Ｉ，?Ｉ??ｍ?圍丨［１丨１丨?〇，１?Ｉｐ?ｍ?ｌｌｌｌｌｌ??／?／?＃?／?／?／?／?／??／?／?／?／．Ｖ??，／?＾?／??图５?Ａ５４９与ＸＷＬＣ－０５细胞磷酸化ＡＫＴ与总ＡＫＴ的相对水平??３７??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力的比较研究[J]. 张云辉,谭燕,袁兵,王盛兰,赵珊,王廷华. 昆明医学院学报. 2011(07)
[2]肺癌细胞系XWLC-05的建立及其生物学特性研究[J]. 闫凤彩,王秦秦,阮永华,马丽菊,贾建桃,金克炜. 癌症. 2007(01)
[3]室内燃煤空气污染与肺癌及遗传易感性——宣威肺癌病因学研究22年[J]. 何兴舟. 实用肿瘤杂志. 2001(06)
[4]云南个旧和宣威地区肺癌p53突变检测研究[J]. 黄燕萍,金克炜,高倩,李宝刚. 华西医科大学学报. 2001(03)
[5]外源性野生型p53基因影响肺腺癌XWLC-05细胞放射敏感性研究[J]. 王承红,李文辉,王秦秦,秦继勇,李昕,侯宇,王丽,张国良. 中华放射肿瘤学杂志. 2011 (05)
本文编号：3500918
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２?ＸＷＬＣ－０５细胞转染野生型ｐ５３基因７２小时荧光显微镜下观察（１０ｘ）??２、导入的外源性野生型Ｐ５３基因表达情况及功能状态：??
间ＡＫＴ的表达基本无变化，以总ＡＫＴ蛋白作为内参照，力卩药组ＸＷＬＣ－０５细胞的??ｐＡＫＴ３８０?（＃＃ｐ＜０．０５），ｐＡＫＴ４７３?（＊＊尸＜０．０５）蛋白表达明显下降，加药组?Ａ５４９??细胞的?Ｐ－ＡＫＴ３８０?（＃ｐ＜０＿０５），ｐ－ＡＫＴ４７３（＊；５＜０．０５）蛋白表达也明显下降（图?４／５），??在同一浓度的抑制剂下ＸＷＬＣ－０５细胞没有Ａ５４９细胞的抑制效果好。??１２?３?１??Ａｋｔ??ｐ－Ａｋｔ４７３?ｍｍｍｍ??ｐ－Ａｋｔ?３０８??图４加ＬＹ２９４００２抑制剂前后Ａ５４９细胞和ＸＷＬＣ－０５细胞抑制ＰＩ３Ｋ情况??注：１－４?分别为?Ａ５４９?细胞，Ａ５４９＋ＬＹ２９４００２?细胞，ＸＷＬＣ－０５?细胞，??ＸＷＬＣ－０５＋ＬＹ２９４００２?细胞。??＊?＃＃??ｏ．８ｌ?１?１?０８１?＃?，＿，??４??＿Ｔ?Ｉ，?Ｉ??ｍ?圍丨［１丨１丨?〇，１?Ｉｐ?ｍ?ｌｌｌｌｌｌ??／?／?＃?／?／?／?／?／??／?／?／?／．Ｖ??，／?＾?／??图５?Ａ５４９与ＸＷＬＣ－０５细胞磷酸化ＡＫＴ与总ＡＫＴ的相对水平??３７??
间ＡＫＴ的表达基本无变化，以总ＡＫＴ蛋白作为内参照，力卩药组ＸＷＬＣ－０５细胞的??ｐＡＫＴ３８０?（＃＃ｐ＜０．０５），ｐＡＫＴ４７３?（＊＊尸＜０．０５）蛋白表达明显下降，加药组?Ａ５４９??细胞的?Ｐ－ＡＫＴ３８０?（＃ｐ＜０＿０５），ｐ－ＡＫＴ４７３（＊；５＜０．０５）蛋白表达也明显下降（图?４／５），??在同一浓度的抑制剂下ＸＷＬＣ－０５细胞没有Ａ５４９细胞的抑制效果好。??１２?３?１??Ａｋｔ??ｐ－Ａｋｔ４７３?ｍｍｍｍ??ｐ－Ａｋｔ?３０８??图４加ＬＹ２９４００２抑制剂前后Ａ５４９细胞和ＸＷＬＣ－０５细胞抑制ＰＩ３Ｋ情况??注：１－４?分别为?Ａ５４９?细胞，Ａ５４９＋ＬＹ２９４００２?细胞，ＸＷＬＣ－０５?细胞，??ＸＷＬＣ－０５＋ＬＹ２９４００２?细胞。??＊?＃＃??ｏ．８ｌ?１?１?０８１?＃?，＿，??４??＿Ｔ?Ｉ，?Ｉ??ｍ?圍丨［１丨１丨?〇，１?Ｉｐ?ｍ?ｌｌｌｌｌｌ??／?／?＃?／?／?／?／?／??／?／?／?／．Ｖ??，／?＾?／??图５?Ａ５４９与ＸＷＬＣ－０５细胞磷酸化ＡＫＴ与总ＡＫＴ的相对水平??３７??
【参考文献】：
期刊论文
[1]宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力的比较研究[J]. 张云辉,谭燕,袁兵,王盛兰,赵珊,王廷华. 昆明医学院学报. 2011(07)
[2]肺癌细胞系XWLC-05的建立及其生物学特性研究[J]. 闫凤彩,王秦秦,阮永华,马丽菊,贾建桃,金克炜. 癌症. 2007(01)
[3]室内燃煤空气污染与肺癌及遗传易感性——宣威肺癌病因学研究22年[J]. 何兴舟. 实用肿瘤杂志. 2001(06)
[4]云南个旧和宣威地区肺癌p53突变检测研究[J]. 黄燕萍,金克炜,高倩,李宝刚. 华西医科大学学报. 2001(03)
[5]外源性野生型p53基因影响肺腺癌XWLC-05细胞放射敏感性研究[J]. 王承红,李文辉,王秦秦,秦继勇,李昕,侯宇,王丽,张国良. 中华放射肿瘤学杂志. 2011 (05)
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