肺癌中E3泛素连接酶TRIM7促进NF-κB通路中p65蛋白降解的功能研究
发布时间：2021-11-24 20:27
第一部分 肺癌中E3泛素连接酶TRIM7促进p65蛋白降解的功能研究trim 7（tripartite motif-containing 7）基因编码了 GNIP1,GNIP2,GNIP3 和TRIM7等至少4个亚型的蛋白质。其中,氨基酸序列最长的亚型GNIP1已经被报道在肺癌中发挥着原癌基因的作用。TRIM7是现在已知四个亚型中氨基酸序列最短的蛋白,其在羧基端（C末端）有15个碱基与GNIP1不同。然而有趣的是,我们的研究显示TRIM7在肺癌中的功能与GNIP1截然相反。与癌旁组织相比,TRIM7在肺癌组织中是低表达的,且与肺癌的临床分级负相关。此外,肿瘤异种移植实验也证实TRIM7能够抑制小鼠皮下肿瘤的生长。在细胞中,TRIM7能够显著地抑制肺癌细胞系的增殖和迁移,同时促进癌细胞的凋亡。进一步研究发现,TRIM7能与NF-κB信号通路中的p65蛋白相互作用并泛素化修饰p65蛋白,通过TRIM7羧基末端的15个氨基酸与p65蛋白相互结合并添加泛素分子,导致p65蛋白经泛素化依赖性的26S蛋白酶体降解,最终抑制NF-κB信号通路的转导。这些研究结果揭示了一个新的由TRIM7参与的NF-...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：117 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２．?１?ＴＲＩＭ７在部分非小细胞肺癌细胞系中低表达??Ａ、图示描述人类ＧＮＩＰ１和ＴＲＩＭ７蛋白的结构
?第一部分第２章ＴＲ１Ｍ７在肺癌中呈现低表达???胞肺癌中ＴＲＩＭ７蛋白的表达情况，我们使用非小细胞肺癌组织芯片，通过免疫??组化的方法检测了?８２例非小细胞肺癌病人癌组织及癌旁组织中ＴＲＩＭ７蛋白的表??达。通过统计分析，我们发现ＴＲＩＭ７表达水平有随着非小细胞肺癌临床分期等??级提高而降低的趋势（图２．２ＢＯ，同时有６２对组织的癌组织中ＴＲＩＭ７表达水??平低于癌旁组织（图２．２Ｄ）。这说明ＴＲＪＭ７蛋白水平在非小细胞肺癌中是低表??达的。??Ａ?１＃?２＃?３＃?４＃??八?，?、?，￣、?，￣、?Ｚ＾、??、Ｔ?Ｎ?Ｔ?Ｎ?ＪＴ＾?Ｎ?Ｔ??ＴＫＩＭ７＾｜＾?ｐ＊?＂７＊?ｆ：＇：：?Ｓｉ?１１??Ｐ？八ｃ“ｎ?＊?１１１１１１?ｍｍｍｍ?ｗ?ｒｎｍｍｍ?ｍｍｍｍ?ｍｍｍ??Ｐ－Ａｃｔｉｎ?＾一?：：一＾丨丨一??ＮＴ?ＮＴ?ＮＴ?ＮＴ??＾＾＾＾??５＃?６＃?７＃?８＃??Ｂ?Ｓｔａｇｅ?Ｉ?Ｓｔａｇｅ?ＩＩ?Ｓｔａｇｅ?１１１??Ｔｕｍｏｒ?ｔｉｓｓｕｅ??；＂?！ｙｉｘ?＇＿Ｌ?．?＿?．?＊?．??＊?？？？?－?八．《?．?■?．??■ｗ?丨＇??Ａｄｊａｃｅｎｔ?？?（ｉ?．?．?．?＇?＼：－?，??ｎｏｒｍａｌ?ｔｉｓｓｕｅ?：?，?；．?Ｉ?＇?■?＾?＇?？??．－ｖ．：：．．人??Ｃ?…?Ｄ??ｌ?２００］?＾?＇?￣Ｔ＂?■?Ｓｔａｇｅ?Ｉ?〇?｜１５??Ｉ?１叫?ｆ?．?ｉｉｆ］?Ｓｉｌａｇｌｌｌｌ?１｜｜?丨｜｜｜??ｉｊｌｉｏ（１１１?ＰＦｉｌｌｉ
第一部分第３章影响非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡、周期以及迁移等表型??解细胞提取ＲＮＡ反转录生成ｃＤＮＡ，用于实时定量ＰＣＲ检测ＣＤＣ２５Ｃ、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１??和ＸＩＡＰ等凋亡和周期相关基因的表达。Ｄ、ＮＱ－Ｈ１２９９细胞分别转染ｐＣＭＶ６空载质粒、??ｔＧＦＰ－ＴＲＩＭ７质粒。４８小时后，裂解细胞提取总蛋白通过蛋白免疫印迹检测凋亡（左图）和??周期（右图）相关蛋白的表达。??３．?４．?３过表达ＴＲＩＭ７影响非小细胞肺癌细胞迁移??我们将１０ｃｍ培养皿中的ＮＣＩ－Ｈ１２９９细胞接种至６孔板，使贴壁后细胞密度??至７０％－８０％。然后用ＰＣＭＶ６４ＧＦＰ－ＴＲＪＭ７质粒转染细胞，２４小时细胞密度达??到９０％－１００％后进行划痕。之后分别在０、１２、２４小时对同一位置用显微镜拍照。??我们发现，与对照组相比，过表达ＴＲＩＭ７后细胞“伤痕”的愈合速度明显变慢（图??３．３Ａ）。结果统计如图３．３Ｂ所示。这表明过表达ＴＲＩＭ７显著地抑制了?ＮＣＩ－Ｈ１２９９??细胞的迁移能力。??Ａ?Ｏｈ?１２?ｈ?２４?ｈ??Ｖｅｃｔｏｒ??ＴＲＩＭ７??Ｂ??ＣＤ?１００ｌ?ｗ?．??ｃ?■?Ｖｅｃｔｏｒ??ｉ?８０－?■?ＴＲＩＭ７??０）??Ｘ：??＂Ｄ?６０￣??爹?Ａ??ｓ?２〇－?■?＿??１２ｈ?２４ｈ??图３．?３过表达ＴＲＩＭ７影响非小细胞肺癌细胞迁移??Ａ、细胞划痕实验。ＮＣＩ－Ｈ１２９９细胞分别转染ｐＣＭＶ６空载质粒、ｔＧＦＰ－ＴＲＩＭ７质粒。２４－４８??小时，待细胞密度达到９０％－１００％进厅划痕操作。ＰＢＳ洗去悬浮细胞后加入含１％ＦＢＳ的培??２４??
本文编号：3516697
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【文章页数】：117 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２．?１?ＴＲＩＭ７在部分非小细胞肺癌细胞系中低表达??Ａ、图示描述人类ＧＮＩＰ１和ＴＲＩＭ７蛋白的结构
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