基于GC/MS和LC/MS技术的缺氧对乳腺癌细胞代谢影响的研究

发布时间：2021-11-28 13:52

　　肿瘤细胞与其微环境的相互作用是肿瘤代谢重编程的一大重要特征,在影响肿瘤代谢的多种微环境中,缺氧是尤为重要的一个因素。缺氧是大部分实体瘤的共同特征,且在肿瘤代谢调控、侵袭、转移等各个方面均发挥着重要作用。对于缺氧对肿瘤代谢调控的研究,目前在基因组和转录组方面已有大量研究基础。缺氧会诱导缺氧诱导因子HIF的表达,HIF会调控多种代谢相关的基因和酶的表达进而影响肿瘤的代谢。而研究发现单纯地抑制HIF介导的通路,有时并不能抑制肿瘤的生长,即可能存在其他非HIF依赖的调控机制。已有研究发现了一些非HIF调控的基因及其调控机制,特别是某些显著变化的代谢物也会通过多种机制影响信号通路的传导进而参与缺氧应答。因而寻找致瘤代谢物为缺氧应答机制的研究提供了新的思路。代谢组学特别是同位素标记代谢组学,因其在代谢物及代谢通路分析方面的优势越来越被广泛地应用于肿瘤细胞代谢的研究中。目前,采用细胞代谢组学进行肿瘤缺氧的研究大多基于细胞及分子生物学的研究基础靶向地针对某一具体代谢物或者具体代谢路径进行下游验证研究,而对于整体代谢组的非靶向研究则相对较少。大量研究已表明代谢物也能参与信号通路及表观遗传的调控,进而诱发... 

【文章来源】：军事科学院北京市

【文章页数】：151 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

样本不同前处理方法流程图

置于 37℃5%CO294%N2条件下培养。两组均培养 48 小时。图 1.1 样本不同前处理方法流程图1.2.2 代谢物的提取A 组细胞经冷的 PBS 清洗三遍，加入冷的生理盐水，采用细胞刮刀获取细胞。1000rpm 离心 3min，获取细胞沉淀，然后加入冷的 50%的 ACN。B 组细胞经冷的 PBS 清洗三遍，加入冷的 80 % CH3OH/ H2O，采用细胞刮刀获取细胞。然后两组细胞均在冰浴条件下超声，涡旋 1min 后，置于-20℃放置 30min；取出后冰浴条件下超声，涡旋 1min 后，4℃ 13000 rpm 离心 20min

较为合理的细胞获取方法是加入冷的生理盐水或有机试剂，采用细胞刮刀细胞。较为理想的提取试剂为 80%CH3OH/H2O 和 50%ACN/H2O[45]。该部究比较了两种方法-80% CH3OH/H2O 和 50% ACN/H2O 提取后 GC/MS 的检果，根据总离子流色谱图（如图 1.3）信号响应及检测到的代谢物数量，发用 80% CH3OH/ H2O 进行细胞淬灭提取得到的检测结果更好。


本文编号：3524541