PKGⅡ对胃癌细胞EGF/EGFR介导的蛋白质表达和蛋白质磷酸化的调控作用
发布时间：2021-11-29 03:50
Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶（Type Ⅱ cGMP dependent protein kinase,PKG Ⅱ）是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,能够通过使蛋白质发生磷酸化对相关的细胞活动发挥调控作用。我们的前期研究发现,PKG Ⅱ能够通过使EGFR发生磷酸化,抑制EGFR自身以及其下游信号转导通路的激活,进而影响肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等生物学活动,是一种潜在的新型EGFR抑制剂。EGFR是与多种肿瘤的发生发展相关的受体酪氨酸激酶,它的过表达、激活或突变能够促进肿瘤细胞的增殖和转移。包括EGF在内的配体与EGFR结合,可使其酪氨酸激酶活性增加,导致下游信号转导通路的过度活化,使得细胞的多种生物学活动发生改变。而在这些改变中,不可避免地要涉及蛋白质表达和蛋白质磷酸化的改变。我们的前期工作已经对PKG Ⅱ抑制EGF/EGFR介导的信号转导和生物学活动变化进行了系统的研究和阐述。为进一步了解PKG Ⅱ对EGFR的抑制作用,本研究采用蛋白印迹法和双向电泳结合质谱分析等方法,观察了PKG Ⅱ对EGFR激活导致的蛋白表达改变和蛋白磷酸化水平改变的抑制/逆转作用。在蛋白质表达方面,我们首先研究了PKG...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：102 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PKGII结构
EGF/EGFR 介导的蛋白质表达和蛋白质磷酸化的调控作用8图1.2 细胞核EGFR的传递及功能相关作用通路Fig. 1.2 Nuclear EGFR transloction and function(引自Brand TM, et al. Radiother Oncol. 2013 Sep)在上世纪 80 年代，Wakshul 等人发现 EGF 和 EGFR 的细胞膜复合物尽管在瞬时反应时能够激活下游的信号通路，但是并不能够诱导 DNA 的合成[61]，对EGFR 可能的核转位提出了猜测，后续的研究在多种细胞系以及组织中发现了EGFR 的细胞核定位[62-65]。2001 年，Lin 等发现了细胞核 EGFR 与组织的高度增殖活性相关，同时，EGFR的羧基末端包含的强反式激活结构域，能够融合到 GAL4 DNA 结合结构域上[66]。此外
江苏大学博士学位论文2.3.2 文献检索结果的验证为进一步明确 PKG II 对 EGF 刺激造成的蛋白表达改变的影响，我们选取了c-MYC、MMP1 和 NOS1 三个蛋白作为研究对象。在本实验中，我们用先 Ad-PKGII 感染 HGC-27 和 AGS 胃癌细胞，感染 24h 后换无血清培养液饥饿细胞 12h，加入终浓度为 250μM 的 8-pCPT-cGMP 作用使其激活，1h 后加入终浓度为 100ng/mL 的 EGF 刺激细胞，共同作用 24h 后，提取总蛋白。使用 Western blotting检测其蛋白表达的变化。结果表明，感染 Ad-PKG II 可使 PKG II 表达增加，与LacZ 组相比 HGC-27 和 AGS 细胞的 c-MYC、金属基质蛋白酶 1（matrixmetalloproteinase1，MMP1）和一氧化氮合成酶 1（nitric oxide synthase 1，NOS1）表达水平明显升高（p<0.05）；PKG II 和 8-pCPT-cGMP 共同作用后能够显著抑制EGF 对胃癌细胞 c-MYC、MMP1 和 NOS1 表达水平升高（p<0.05），结果见图 2.1。
【参考文献】：
博士论文
[1]PKGⅡ对LPA诱导的胃癌细胞迀移及RhoA和Rac1激活的影响[D]. 王瑛.江苏大学 2015
[2]PKGⅡ对胃癌细胞由EGF/EGFR启动的信号转导和相关的生物学活动的影响[D]. 蒋璐.江苏大学 2013
硕士论文
[1]自交联透明质酸凝胶对胃癌和肝癌细胞转移和增殖抑制作用的研究[D]. 庞吉.江苏大学 2016
本文编号：3525783
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：102 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
PKGII结构
EGF/EGFR 介导的蛋白质表达和蛋白质磷酸化的调控作用8图1.2 细胞核EGFR的传递及功能相关作用通路Fig. 1.2 Nuclear EGFR transloction and function(引自Brand TM, et al. Radiother Oncol. 2013 Sep)在上世纪 80 年代，Wakshul 等人发现 EGF 和 EGFR 的细胞膜复合物尽管在瞬时反应时能够激活下游的信号通路，但是并不能够诱导 DNA 的合成[61]，对EGFR 可能的核转位提出了猜测，后续的研究在多种细胞系以及组织中发现了EGFR 的细胞核定位[62-65]。2001 年，Lin 等发现了细胞核 EGFR 与组织的高度增殖活性相关，同时，EGFR的羧基末端包含的强反式激活结构域，能够融合到 GAL4 DNA 结合结构域上[66]。此外
江苏大学博士学位论文2.3.2 文献检索结果的验证为进一步明确 PKG II 对 EGF 刺激造成的蛋白表达改变的影响，我们选取了c-MYC、MMP1 和 NOS1 三个蛋白作为研究对象。在本实验中，我们用先 Ad-PKGII 感染 HGC-27 和 AGS 胃癌细胞，感染 24h 后换无血清培养液饥饿细胞 12h，加入终浓度为 250μM 的 8-pCPT-cGMP 作用使其激活，1h 后加入终浓度为 100ng/mL 的 EGF 刺激细胞，共同作用 24h 后，提取总蛋白。使用 Western blotting检测其蛋白表达的变化。结果表明，感染 Ad-PKG II 可使 PKG II 表达增加，与LacZ 组相比 HGC-27 和 AGS 细胞的 c-MYC、金属基质蛋白酶 1（matrixmetalloproteinase1，MMP1）和一氧化氮合成酶 1（nitric oxide synthase 1，NOS1）表达水平明显升高（p<0.05）；PKG II 和 8-pCPT-cGMP 共同作用后能够显著抑制EGF 对胃癌细胞 c-MYC、MMP1 和 NOS1 表达水平升高（p<0.05），结果见图 2.1。
【参考文献】：
博士论文
[1]PKGⅡ对LPA诱导的胃癌细胞迀移及RhoA和Rac1激活的影响[D]. 王瑛.江苏大学 2015
[2]PKGⅡ对胃癌细胞由EGF/EGFR启动的信号转导和相关的生物学活动的影响[D]. 蒋璐.江苏大学 2013
硕士论文
[1]自交联透明质酸凝胶对胃癌和肝癌细胞转移和增殖抑制作用的研究[D]. 庞吉.江苏大学 2016
本文编号：3525783
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3525783.html
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