趋化因子CCL20参与骨髓瘤细胞对埃罗妥珠单抗及来那度胺耐药的研究

发布时间：2021-11-29 00:45

　　目的:多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是一种恶性浆细胞疾病,目前仍不可治愈。免疫治疗因其靶向性及低毒性在MM的治疗领域得到了越来越多的关注和研究。来那度胺（Lenalidomide）是广泛应用的免疫调节剂。埃罗妥珠单抗（Elotuzumab,Elo）是继CD38单克隆抗体Daratumumab之后,第二个被批准用于治疗MM的单克隆抗体药物,与来那度胺和地塞米松联合（E-Rd方案）治疗复发/难治性MM。埃罗妥珠单抗靶点为信号淋巴细胞激活分子家族成员7（SLAMF7,也称为CS1）。虽然E-Rd方案获得很好的疗效,但仍有部分患者出现耐药。单克隆抗体类药物耐药是目前免疫治疗的研究热点。关于埃罗妥珠单抗耐药的相关研究少见。本研究拟通过体内及体外研究,探索免疫治疗耐药发生的机制,寻求新的免疫治疗靶点及逆转耐药。研究方法:1、模拟人体耐药发生过程,应用小剂量药物诱导的方法构建埃罗妥珠单耐药（U266/EloR,UE）及来那度胺与埃罗妥珠双耐药（U266/R10R/EloR,URE）的骨髓瘤耐药细胞系;2、基因表达谱芯片检测U266野生型（UW）和已经构建的U266来那度胺单耐... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：41 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

266敏感及耐药细胞株对埃罗妥珠单抗的药物敏感性A.来那度胺敏感（U266/WT，UW）及埃罗妥珠耐药（U266/EloR，UE）细胞株在与外周血单个核细胞（PBMC）共培养条件下对埃罗妥珠单抗（Elo）的药物敏感性

中国医科大学硕士学位论文113.2基因表达谱芯片分析显示CCL20在耐药株中表达下降为进一步探索埃罗妥珠单抗耐药的可能机制，我们利用基因表达谱芯片来检测四种细胞：来那度胺敏感（U266/WT,WT）株、来那度胺单耐药（U266/R10R,UR）株、埃罗妥珠单耐药（U266/EolR,UE）株、来那度胺与埃罗妥珠双耐药（U266/R10R/EloR,URE）株基因表达的差异。结果发现，CCL20在耐药细胞系表达明显下调（红色箭头指示）。图2.部分敏感及耐药细胞的基因表达差异热图3.3PCR方法检测验证CCL20在耐药细胞株及复发难治MM患者中表达下降RT-qPCR检测CCL20的mRNA在四种细胞系以及MM患者骨髓浆细胞中的表达，结果证实：（1）在细胞系中：与来那度胺敏感株（U266/WT,UW）相比，来那度胺单耐药（U266/R10R,UR）株、埃罗妥珠单耐药（U266/EloR,UE）株、来那度胺与埃罗妥珠双耐药（U266/R10R/EloR,URE）株CCL20的表达均有不同程度下降，三组均具有统计学差异（p<0.05），其中来那度胺与埃罗妥珠双耐药（U266/R10R/EloR,URE）株中CCL20mRNA的表达下降最明显（p<0.001）（图3A）这与基因芯片结果一致；（2）在MM患者中：收集27例初诊MM（NDMM）患者骨髓液标本以及5例复发难治MM(RRMM)的骨髓液标本，提取并分离骨髓

中国医科大学硕士学位论文12CD138+浆细胞，进行PCR检测，结果显示：与初治MM相比，复发难治MM患者CCL20的mRNA表达水平下降，差异有统计学意义（P<0.01）（图3B）。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。图3.RT-qPCR验证CCL20基因的相对表达A.CCL20在四种骨髓瘤细胞系中的相对表达B.CCL20在初治MM患者与复发难治MM患者中的相对表达3.4生物信息学分析CCL20在复发难治MM中表达下降进一步我们利用公共数据库进行验证，采用R语言下载GEO数据库中GSE16791、GSE31504和GSE51317的基因表达谱芯片数据进行作图和统计分析。结果显示：与初治MM患者相比，复发难治MM患者骨髓浆细胞CCL20表达下降，这与我们PCR实验结果是一致的（图4）。AB


本文编号：3525490