Hsp90抑制剂、伏立诺他和阿的平对急性白血病的作用和机制

发布时间：2024-06-30 21:44

　　Ikaros作为一种重要的转录因子,在正常造血系统中发挥着非常重要的作用。在肿瘤细胞中Ikaros能发挥肿瘤抑制或肿瘤促进作用,但是它在急性髓系白血病(AML)中的作用尚不明确。我们的研究显示:用RNA干扰技术在细胞内沉默热休克蛋白90(Hsp90)或在AML细胞内使用Hsp90抑制剂STA-9090后,细胞内Ikaros的蛋白表达均发生下调;同时我们发现STA-9090引起的细胞内Ikaros的下调是由热休克同源蛋白70碳末端结合蛋白(CHIP)这个E3泛素连接酶所介导的。进一步的研究显示细胞内Ikaros基因的沉默能够显著抑制体内外AML细胞的增殖。综合以上研究,我们发现了细胞内Hsp90与Ikaros的相互作用关系,并且深入探讨了Hsp90抑制剂引起细胞内Ikaros降解的具体机制。该研究有望为今后Hsp90抑制剂应用于AML的临床试验提供一定的线索和理论基础。急性淋巴细胞白血病(ALL)是好发于儿童和青少年的恶性血液系统疾病,尽管目前急性淋巴细胞白血病在儿童中治愈率可高达90%,但是该病在成人中的治愈率低,且预后差,因此,人们迫切地需要寻找新的治疗方案。本论文研究显示组蛋白去乙...

【文章页数】：98 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
全文主要缩略语中英文对照表
第一部分 :CHIP介导急性髓系白血病细胞内IKAROS的降解和相关机制研究
    第一章 :绪论
        1.1 研究背景
        1.2 本研究的主要内容
    第二章 :HSP90抑制剂引起急性髓系白血病细胞内IKAROS的降解
        2.1 材料与方法
            2.1.1 试剂和抗体
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要溶液配制
            2.1.4 主要实验器具的处理
            2.1.5 细胞培养
            2.1.6 单个核细胞分选
            2.1.7 台盼蓝拒染法检测细胞活率
            2.1.8 基因敲除质粒的构建和筛选
            2.1.9 病毒的包装和感染
            2.1.10 细胞总蛋白的提取
            2.1.11 免疫印迹(western blot)
            2.1.12 实时荧光定量PCR(Q-PCR)
            2.1.13 统计学分析
        2.2 结果
            2.2.1 Hsp90抑制剂引起急性髓系白血病细胞内Ikaros的减少
            2.2.2 Hsp90抑制剂对细胞内Ikaros mRNA的影响
            2.2.3 Hsp90抑制剂对急性髓系白血病细胞增殖和活率的影响
            2.2.4 Hsp90抑制剂不改变其他类型血液肿瘤细胞内Ikaros蛋白的表达水平
        2.3 小结与讨论
    第三章 :CHIP介导的急性髓系白血病细胞内IKAROS降解的相关机制研究
        3.1 材料与方法
            3.1.1 试剂和抗体
            3.1.2 主要仪器
            3.1.3 质粒共转染
            3.1.4 免疫荧光
            3.1.5 免疫共沉淀(co-IP)
            3.1.6 Western blot检测蛋白表达
            3.1.7 真核表达质粒的构建
            3.1.8 蛋白质截短体的构建
            3.1.9 质粒突变
            3.1.10 统计学方法
        3.2 结果
            3.2.1 细胞内Hsp90与Ikaros的共定位
            3.2.2 细胞内Hsp90与Ikaros的相互作用
            3.2.3 Hsp90抑制剂引起Ikaros的降解是通过泛素蛋白酶体途径所介导
            3.2.4 Hsp90抑制剂并不是通过E3泛素连接酶CRBN引起AML细胞内Ikaros的降解
            3.2.5 Hsp90抑制剂引起的Ikaros降解是通过E3泛素连接酶CHIP介导
            3.2.6 细胞内CHIP和Ikaros的共定位
            3.2.7 CHIP通过TPR结构域与Ikaros发生相互作用
            3.2.8 Hsp90抑制剂通过作用于Ikaros的N端促进Ikaros的降解
        3.3 小结与讨论
    第四章 :急性髓系白血病细胞内IKAROS降解引起的生物学效应
        4.1 材料与方法
            4.1.1 试剂与耗材
            4.1.2 主要仪器
            4.1.3 主要溶液配方
            4.1.4 Ikaros基因敲除质粒的构建和筛选
            4.1.5 细胞增殖的测定
            4.1.6 细胞周期分析
            4.1.7 动物实验
            4.1.8 免疫组化实验
            4.1.9 统计学方法
        4.2 结果
            4.2.1 AML细胞内Ikaros敲除后对细胞增殖和细胞周期的影响
            4.2.2 AML细胞内Ikaros敲除后在体内对肿瘤的抑制作用
        4.3 小结与讨论
    第五章 :讨论
    参考文献
第二部分 :SAHA联合QC对急性淋巴细胞白血病效应及机制研究
    第一章 :绪论
        1.1 研究背景
        1.2 本研究的主要内容
    第二章 :SAHA联合QC对急性淋巴细胞白血病效应及机制研究
        2.1 材料与方法
            2.1.1 试剂和抗体
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 细胞培养
            2.1.4 台盼蓝拒染法检测细胞活率
            2.1.5 单个核细胞的分选
            2.1.6 AnnexinV-APC/PI双染法检测细胞凋亡
            2.1.7 Western blot(蛋白免疫印迹)
            2.1.8 细胞内活性氧(ROS)的检测
            2.1.9 动物体内实验
            2.1.10 统计学方法
        2.2 结果
            2.2.1 SAHA联合QC在急性淋巴细胞白血病病人细胞上的效应
            2.2.2 SAHA联合QC引起急性B淋巴细胞白血病细胞发生凋亡
            2.2.3 SAHA联合QC诱导的B-ALL细胞凋亡与线粒体功能紊乱密切相关
            2.2.4 SAHA联合QC具有体内抑制急性淋巴细胞白血病细胞皮下移植瘤增殖的效应
        2.3 小结与讨论
    参考文献
致谢
附录一:学术论文和科研成果目录



本文编号：3999112