蜂毒素作用于组织蛋白酶S抗肝癌血管生成机制研究

发布时间：2021-11-29 10:20

　　研究背景肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是非常普遍和病死率极高的恶性肿瘤,位居我国恶性肿瘤死亡率第二位,严重危害人民健康。流行病学研究表明慢乙肝病毒（HBV）或丙型肝炎病毒（HCV）感染是肝癌发生的主要危险因素,其次酗酒、黄曲霉素食品污染都和肝癌密切联系。分子生物学研究表明肝癌发生发展、转移复发是一个多步骤多因素过程,涉及细胞内一系列复杂变化,其中肿瘤血管生成起重要作用。此外,肝癌的发病隐匿,不易早期诊断,等患者出现典型症状往往已经发展到肝癌中晚期,失去了有效治疗时间。最近研究表明,目前肝癌首选治疗方法仍是手术,但即使早期手术切除的小肝癌,5年内仍有50%左右的转移复发率。因肝癌的发生发展是多因素共同参与,临床上治疗肝癌的许多药物作用机制靶向性过强,仅仅针对肝癌发生机制中某一因素,适应人群偏少,且患者极易出现耐药和不同程度毒副反应,总体上不能获得理想治疗效果。因此,研发新的抗肝癌药物,对我国这样一个肝癌高发国家而言,有着极其重要的理论意义和应用价值。组织蛋白酶是一类在酸性PH环境中被活化的溶酶体蛋白酶,属于半胱氨酸蛋白酶,在人类基因组中,11种不同... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：180 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
    参考文献
第一部分 CTSS表达水平与肝癌细胞转移潜能的关系
    1. 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2. 结果
        2.1 RT-PCR检测CTSS基因在不同肝细胞系中的表达
        2.2 不同肝癌细胞系CTSS蛋白水平表达
    3 讨论
    4 小结
    参考文献
第二部分 慢病毒介导的shRNA-CTSS细胞株的建立
    1 材料及试剂
        1.1 细胞
        1.2 主要试剂和试剂盒
        1.3 主要实验仪器
        1.4 主要溶液配制
        1.5 所用引物
        1.6 质粒和菌株
    2 方法
        2.1 培养293FT细胞
        2.2 293FT细胞冻存、复苏
        2.3 质粒转化
        2.4 pMagic 8.1干扰质粒功能检测
        2.5 pMagic 8.1慢病毒载体的包装
        2.6 病毒感染MHCC97-H细胞制备稳定株
    3. 结果
        3.1 质粒鉴定
        3.2 慢病毒包装
        3.3 Western Blot检测慢病毒感染的MHCC97-H细胞中CTSS蛋白的表达情况
    4. 讨论
    5. 小结
    参考文献
第三部分 shCTSS对MHCC97-H细胞株生物学行为的影响
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2. 结果
    3 讨论
    4.小结
    参考文献
第四部分 蜂毒素抑制CTSS调控相关信号通路对肝癌细胞生物学行为的影响
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2. 结果
        2.1 蜂毒素抑制稳定株细胞增殖活力
        2.2 蜂毒素抑制稳定株细胞克隆形成
        2.3 划痕实验和Transwell小室趋化实验观察蜂毒素对稳定株运动能力的影响
        2.4 ELISA实验检测蜂毒素对VEGF分泌的影响
        2.5 观察蜂毒素对HUVECs的影响作用
        2.6 蜂毒素对不同侵袭能力肝癌细胞CTSS调控的作用
        2.7 蜂毒素抑制稳定转染的MHCC97-H细胞CTSS、VEGF-A、p-VEGFR2、p-Ras、p-Raf,p-MEK1和p-ERK1/2蛋白的表达
    3 讨论
    4 小结
    参考文献
第五部分 蜂毒素在体内调控C T S S蛋白表达和VEGF-A/VEGFR2/MEK1/ERK1/2通路抑制肝癌细胞生长和血管形成
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2.结果
        2.1 鼠模型大体观察
        2.2 裸鼠肝移植瘤的体积和重量
        2.3 CD34在裸鼠移植瘤组织中的表达情况
        2.4 蜂毒素抑制原位移植人肝细胞癌转移裸鼠模型肝原位移植瘤中CTSS和VEGF-A/VEGFR2/MEK1/ERK1/2通路相关蛋白的表达
    3 讨论
    4 小结
    参考文献
全文总结
本研究中的局限性和展望
附录
综述
    参考文献
致谢
在读期间发表论文及研究成果



本文编号：3526332