香兰素衍生物对肝癌细胞恶性表型的影响及分子靶点的筛选

发布时间：2021-12-02 20:23

　　目的:研究天然小分子化合物N-trans-feruloyloctopamine（FO）对人肝癌细胞系Huh7和HCCLM3细胞增殖、迁移及侵袭的影响,探讨FO抑制肝癌细胞生长的作用靶点及调控的关键机制。方法:体外培养肝癌Huh7和HCCLM3细胞,采用CCK-8试剂盒检测不同浓度FO对人肝癌细胞Huh7和HCCLM3增殖能力的抑制作用,确定IC50;采用细胞划痕实验和Transwell实验观察FO对Huh7和HCCLM3细胞迁移及侵袭能力的影响;通过Western Blot检测FO干预后Huh7和HCCLM3细胞中AKT、p38 MAPK、ERK1/2、p65的表达水平的影响,并进一步分析FO对人肝癌细胞EMT通路中关键蛋白Slug、Snail、N-cadherin、E-cadherin表达水平变化。用流式细胞术检测FO干预对细胞凋亡的影响;利用RNA-seq技术筛选FO干预后肝癌细胞中的差异基因,用DAVID生物信息学工具对差异基因进行GO和KEGG富集分析,进一步明确差异基因调节的功能和信号通路,结合GO和KEGG分析数据,筛选出FO调节的潜在靶基因。结果:1.细胞活性实验:不同浓... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【图文】：

FO的化学结构式

兰州大学硕士研究生学位论文香兰素衍生物通过PI3K-AKT、Apoptosis通路对人肝癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响的研究161.2.7统计学方法实验数据用SPSS15.0、GraphpadPrism5.01进行统计学处理。各实验都进行三次重复验证，实验内设置复孔，实验组与对照组进行独立t检验和差异性分析，p＜0.05视为具有差异性，p＜0.01视为显著差异。1.3实验结果1.3.1FO的药效及IC50的测定为了检验FO对肝癌细胞的药效，我们采用了细胞活性实验检测了FO对Huh7和HCCLM3细胞活力的影响。用不同浓度FO（0mΜ、0.1mΜ、0.5mΜ、1mΜ、2mΜ、4mΜ、10mΜ、20mΜ、50mΜ）分别干预肝癌细胞48h。结果如图1-3-1所示，我们发现FO以浓度依赖性的方式抑制肝癌细胞增殖，FO浓度越高肝癌细胞活性就越低。通过细胞存活率的计算，我们得到了FO在肝癌细胞Huh7和HCCLM3的半抑制浓度分别为：2.00mM、2.27mM;图1-3-1验证不同浓度FO（0mΜ、0.1mΜ、0.5mΜ、1mΜ、2mΜ、4mΜ、10mΜ、20mΜ、50mΜ）对肝癌细胞Huh7和HCCLM3干预48h后，对细胞活力的影响(此实验用5-Fu作为对照，检测FO的药效)1.3.2FO对人肝癌细胞增殖能力的影响根据CCK-8实验所得到的结果，我们选定了FO的IC50浓度作为后续实验的干预浓度。我们分别对Huh7和HCCLM3进行FO（2.00mM、2.27mM）干预不同时间（24h、48h、72h）。结果如图1-3-2所示，与对照组相比，FO处理组Huh7和HCCLM3细胞的增殖明显受到抑制，且作用时间越长，抑制越明显。

-2FO对肝癌细胞增殖能力的影响

【参考文献】：
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本文编号：3529143