YAP蛋白对NF-κB信号通路的调控及其分子机制研究
发布时间：2021-12-09 21:03
成人T细胞白血病（adult T-cell leukemia,ATL）是一种恶性淋巴系增殖性肿瘤疾病,其病原体为人类T细胞白血病病毒1型（human T-cell leukemia virus type1,HTLV-1）。在ATL的发生过程中,HTLV-1编码的关键病毒蛋白Tax能够参与激活多条与肿瘤形成相关的信号通路。有研究表明,Tax通过激活NF-κB信号通路从而促进ATL细胞的恶性增殖,进而导致ATL的发生。然而,在ATL发生后期,Tax由于表观遗传学或非表观遗传学的方式导致其表达下降甚至不表达,而NF-κB信号通路仍然持续激活。这表明在ATL中还存在其他的分子机制维持NF-κB信号通路的激活。越来越多的研究发现,Hippo信号通路的关键蛋白YAP在多种肿瘤中存在高表达,且Hippo信号通路不仅与器官的大小和细胞的再生有关,还与体内的多条信号通路存在交互作用,从而影响了肿瘤的生长。据此,我们推测:在ATL细胞中,YAP是否可以通过参与NF-κB信号通路的调控,从而促进肿瘤细胞的生长呢?为了探究YAP对NF-κB信号通路的调控作用及其分子机制,本课题从以下几方面开展研究:第一部分:...
【文章来源】：浙江师范大学浙江省
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HTLV-1结构及编码的基因[24]
第一章YAP在ATL中存在高表达30实验检测上述细胞样品中YAP基因的表达情况。实验结果如图1.1所示，与对照MOTL-4、Hut78、Jurkat及PHA刺激组相比，YAP基因在HTLV-1阳性细胞株中呈现出不同程度的高表达。图1.1qRT-PCR检测各细胞株中YAPmRNA的表达水平（*p＜0.05，**p＜0.01）Fig.1.1DetecttheexpressionofYAPmRNAincellsbyqRT-PCR1.3.2YAP蛋白在ATL细胞株中高表达之前我们在分子水平上检测发现YAP基因在ATL细胞株中存在高表达，为进一步确认该结果，我们从蛋白水平进行验证。取正常人外周外周血单核细胞（PBMC1,PBMC2）及PHA刺激的PBMC细胞（PHA1，PHA2）及与上述提取cDNA同一批次的细胞株样品，提取总蛋白，Westernbolt检测YAP蛋白与GAPDH蛋白的表达。实验结果如图1.2所示，与对照细胞株Hut78、Jurkat及PBMC、PHA刺激组相比，在HTLV-1阳性细胞株ATL-T、ATL-2、MT-1、MT-2、MT-4、ED、TL-Om1中YAP蛋白同样均存在不同程度的高表达。
第一章YAP在ATL中存在高表达31图1.2Westernbolt检测各细胞株中YAP蛋白的表达水平Fig.1.2DetecttheexpressionofYAPproteininthecellsbyWesternbolt1.3.3YAP基因在ATL临床病人样品中高表达随后我们运用ATL患者样品检测YAP基因的表达情况。我们分别提取了正常人外周血单核细胞（PBMC1，PBMC2），PHA刺激的PBMC细胞（PHA1，PHA2）及ATL患者PBMC细胞的总RNA，并将其反转录合成cDNA。qRT-PCR检测结果如图1.3所示，与对照PBMC组及PHA刺激组相比，ATL患者（ATL2,ATL3,ATL6,ATL11,ATL43）中YAP基因存在高表达现象。综上所述，在ATL细胞株及ATL临床病人样品中均存在YAP高表达现象，由此我们得出结论，YAP在ATL中高表达。图1.3qRT-PCR检测ATL临床病人样品中YAPmRNA的表达水平（*p＜0.05，**p＜0.01）Fig.1.3DetecttheexpressionofYAPmRNAintheATLclinicalpatientsamplesbyqRT-PCR
【参考文献】：
期刊论文
[1]哺乳动物Hippo信号通路:肿瘤治疗的新标靶[J]. 许传铭,万福生. 遗传. 2012(03)
[2]肿瘤坏死因子α通过激活NF-κB信号通路加快肝细胞周期进程[J]. 杨季云,张思仲,郭红,曾祥元,马布仁. 生物化学与生物物理进展. 2007(06)
本文编号：3531306
【文章来源】：浙江师范大学浙江省
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HTLV-1结构及编码的基因[24]
第一章YAP在ATL中存在高表达30实验检测上述细胞样品中YAP基因的表达情况。实验结果如图1.1所示，与对照MOTL-4、Hut78、Jurkat及PHA刺激组相比，YAP基因在HTLV-1阳性细胞株中呈现出不同程度的高表达。图1.1qRT-PCR检测各细胞株中YAPmRNA的表达水平（*p＜0.05，**p＜0.01）Fig.1.1DetecttheexpressionofYAPmRNAincellsbyqRT-PCR1.3.2YAP蛋白在ATL细胞株中高表达之前我们在分子水平上检测发现YAP基因在ATL细胞株中存在高表达，为进一步确认该结果，我们从蛋白水平进行验证。取正常人外周外周血单核细胞（PBMC1,PBMC2）及PHA刺激的PBMC细胞（PHA1，PHA2）及与上述提取cDNA同一批次的细胞株样品，提取总蛋白，Westernbolt检测YAP蛋白与GAPDH蛋白的表达。实验结果如图1.2所示，与对照细胞株Hut78、Jurkat及PBMC、PHA刺激组相比，在HTLV-1阳性细胞株ATL-T、ATL-2、MT-1、MT-2、MT-4、ED、TL-Om1中YAP蛋白同样均存在不同程度的高表达。
第一章YAP在ATL中存在高表达31图1.2Westernbolt检测各细胞株中YAP蛋白的表达水平Fig.1.2DetecttheexpressionofYAPproteininthecellsbyWesternbolt1.3.3YAP基因在ATL临床病人样品中高表达随后我们运用ATL患者样品检测YAP基因的表达情况。我们分别提取了正常人外周血单核细胞（PBMC1，PBMC2），PHA刺激的PBMC细胞（PHA1，PHA2）及ATL患者PBMC细胞的总RNA，并将其反转录合成cDNA。qRT-PCR检测结果如图1.3所示，与对照PBMC组及PHA刺激组相比，ATL患者（ATL2,ATL3,ATL6,ATL11,ATL43）中YAP基因存在高表达现象。综上所述，在ATL细胞株及ATL临床病人样品中均存在YAP高表达现象，由此我们得出结论，YAP在ATL中高表达。图1.3qRT-PCR检测ATL临床病人样品中YAPmRNA的表达水平（*p＜0.05，**p＜0.01）Fig.1.3DetecttheexpressionofYAPmRNAintheATLclinicalpatientsamplesbyqRT-PCR
【参考文献】：
期刊论文
[1]哺乳动物Hippo信号通路:肿瘤治疗的新标靶[J]. 许传铭,万福生. 遗传. 2012(03)
[2]肿瘤坏死因子α通过激活NF-κB信号通路加快肝细胞周期进程[J]. 杨季云,张思仲,郭红,曾祥元,马布仁. 生物化学与生物物理进展. 2007(06)
本文编号：3531306
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