尿液修饰核苷的液相色谱质谱联用分析及其与结直肠癌相关性研究

发布时间：2021-12-11 09:37

　　目的:本研究采用超高效液相色谱-串联质谱法（Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）测定人体尿液中DNA/RNA甲基化、羟甲基化修饰产物5-甲基-2’-脱氧胞苷（5-methyl-2’-deoxycytidine,5-mdC）、5-羟甲基-2’-脱氧胞苷（5-hydroxymethyl-2’-deoxycytidine,5-hmdC）、5-甲基胞苷（5-methylcytidine,5-mrC）和5-羟甲基胞苷（5-hydroxymethylcytidine,5-hmrC）以及RNA氧化修饰产物8-羟基鸟苷（8-hydroxyguanosine,8-OHG）的含量,探索其与结直肠癌（colorectal cancer,CRC）的相关性,以求寻找到一种新的早期诊断结直肠癌的无创性生物标志物。方法:本研究收集了来自浙江大学医学院附属第二医院的健康对照组尿液样本和CRC患者尿液样本,通过固相萃取（solid phase extraction,SPE）对收集到的人体尿液样本进行预处理... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同流动相添加剂条件下8-OHG的MRM质谱图

浙江大学硕士学位论文第一章结果11图1.2C18萃取柱和HLB萃取柱性能比较3.4分析方法的验证通过比较8-OHG与[13C15N2]8-OHG的峰面积比（y）与8-OHG浓度（x，nmol/L）的关系，得到了校正曲线。方程式为y=0.0319x+0.0045，在1-200.0nmol/L的浓度范围内线性良好，相关系数R2=0.9999。该方法的LOQ为4.5fmol。如表1.2所示，通过测量日内和日间相对标准偏差（relativestandarddeviation,RSD）分析了所开发方法的精密度，其值在3.5%以内，证明UPLC-MS/MS测定方法具有极好的重复性。研究还将测定的8-OHG浓度与理论值进行比较，得出日内和日间测定的准确度分别为98.1104.0%和98.8105.4%。在三个加标浓度下，回收率从87.5%到107.2%不等，RSD值小于3.0%（表1.3）。通过测定10份混有内标的递增尿样溶液（1.0,2.0,5.0,10.0,20.0,50.0,100.0,150.0,200.0nmol/L），构建校准曲线，并与校正曲线的斜率比较，得到基质效应为89.0%。所有数据表明，所建立方法的准确性和可重复性是令人满意的。

浙江大学硕士学位论文第一章结果13组和64名大肠癌患者的尿液进行了分析。8-OHG在所有尿样中均能检测到，且8-OHG的保留时间为3.27min，与加入的同位素内标[13C15N2]8-OHG一致（图1.3）。尿Cr浓度用于对尿液中8-OHG浓度的校正，校正后的详细浓度见表1.4及表1.5。图1.3尿液样本中8-OHG和[13C15N2]8-OHG的MRM质谱图表1.4健康对照组的基本信息和8-OHG浓度序号年龄(岁)性别(男:女，M:F)吸烟史(是:否，Y:N)8-OHG浓度(nmol/mmolCr)N139MN1.08±0.02N242MN1.58±0.05N337MN1.28±0.06N456MN1.80±0.09N535MN0.76±0.04N683MY1.49±0.10


本文编号：3534442