ASK1抑制肺癌细胞增殖和迁移的机制研究

发布时间：2021-12-15 18:55

　　目的本研究旨在探讨ASK1(Apoptosis signal-regulating kinase 1)在肺癌细胞增殖和迁移信号传导中的作用,并揭示其调控机制,为开拓新的肺癌分子靶点奠定理论基础,为肺癌的临床诊断和治疗提供新思路。方法1、采用慢病毒表达系统在肺癌A549和H1975细胞株中稳定过表达ASK1野生型(ASK1-WT)和激酶失活突变体(ASK1-KD),并用免疫印迹检测过表达效果;通过细胞计数实验来检测过表达ASK1后,对肺癌细胞增殖能力的影响。2、通过Transwell实验和划痕实验检测过表达ASK1后对肺癌细胞迁移的影响。3、利用p38抑制剂SB203380处理A549细胞,通过细胞计数、Transwell实验和划痕实验,评估p38信号通路在ASK1介导的肺癌细胞增殖和迁移中的作用。4、通过GST pull-down方法检测ASK1是否与YAP和TAZ相互作用。5、采用血清处理肺癌A549和H1975细胞,通过实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测ASK1对YAP/TAZ靶基因CYR61和CTGF的影响;通过免疫荧光检测ASK1对YAP和TAZ核定位的影响。6、采用慢病毒表达...

【文章来源】： 江苏大学江苏省

【文章页数】：81 页

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摘要
abstract
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第一章 绪论
    1.1 肺癌
    1.2 ASK1
        1.2.1 ASK1概述
        1.2.2 ASK1在疾病和肿瘤中的作用
    1.3 YAP/TAZ
        1.3.1 YAP/TAZ概述
        1.3.2 YAP/TAZ与肿瘤
    1.4 研究意义
第二章 ASK1在肺癌细胞增殖和迁移中的作用
    2.1 实验仪器和实验试剂
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验耗材
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 质粒的扩增与提取
        2.2.3 构建和筛选稳定细胞株
        2.2.4 Western blotting检测稳转细胞中ASK1表达
        2.2.5 细胞增殖实验
        2.2.6 细胞迁移实验
    2.3 统计分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 过表达ASK1抑制肺癌细胞增殖
        2.4.2 过表达ASK1抑制肺癌细胞迁移
        2.4.3 ASK1抑制肺癌细胞增殖和迁移不依赖于p38信号通路
    2.5 讨论
第三章 ASK1抑制TAZ活性
    3.1 实验仪器和实验试剂
        3.1.1 实验细胞
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 实验耗材
        3.1.4 实验仪器
        3.1.5 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 GST pull-down
        3.2.3 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)
        3.2.4 Western blotting
        3.2.5 免疫荧光
    3.3 统计分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 ASK1与YAP和TAZ的WW结构域相互作用
        3.4.2 ASK1抑制YAP/TAZ靶基因的转录
        3.4.3 ASK1特异抑制TAZ活性
    3.5 讨论
第四章 TAZ在肺癌细胞增殖和迁移中的作用
    4.1 实验仪器和实验试剂
        4.1.1 实验细胞
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验耗材
        4.1.4 实验仪器
        4.1.5 试剂配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 TAZ shRNA干扰载体构建
        4.2.2 质粒的扩增和提取
        4.2.3 构建和筛选稳定细胞株
        4.2.4 Western blotting检测TAZ敲低效果
        4.2.5 细胞增殖和迁移实验
    4.3 统计分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 敲低TAZ对细胞增殖和迁移产生的抑制作用与ASK1相似
    4.5 讨论
结论与展望
    结论
    展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文
    发表论文



本文编号：3536966