CD20和CD19双靶点CAR-T细胞对B淋巴细胞肿瘤的杀伤作用 全文替换

发布时间：2021-12-19 01:06

　　目的：设计同时靶向B淋巴细胞表面CD20 和CD19 两个抗原蛋白的双特异嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）并制备BiCAR-T细胞，检测其对B淋巴细胞肿瘤细胞的杀伤作用以及对免疫缺陷B-NSG小鼠白血病模型的治疗效果。方法：构建基于鼠源CD19 和人源化CD20 scFv 的双靶点CAR分子，将CAR基因装载于慢病毒载体中，在293T细胞中包装慢病毒，感染健康人T 细胞制备BiCAR-T 细胞。构建表达CD19 和CD20 的K562-CD19-GFP、K562-CD20-GFP 以及表达Luciferase 的Nalm6-Luc-GFP 细胞作为靶细胞，将BiCAR-T 细胞与靶细胞共同孵育，检测其对靶细胞杀伤能力及释放IFN-γ 水平。使用Nalm6-Luc-GFP 细胞构建白血病小鼠模型，尾静脉注射BiCAR-T细胞，通过小动物成像方法观察BiCAR-T细胞对荷瘤小鼠的治疗作用。结果：健康人来源的BiCAR-T 细胞经7 d 培养后扩增良好，扩增倍数为20～50 倍，阳性率为10%～92%，显示成功制备BiCAR-T细胞。在效靶比为10∶... 

【文章来源】：中国肿瘤生物治疗杂志. 2020,27(03)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

CD20/CD19 CAR分子设计示意图

为了进一步验证双靶点BiCAR-T细胞对于CD19和/或CD20阳性肿瘤细胞的杀伤能力，基于CD19和CD20阴性肿瘤细胞K562构建了靶细胞K562-CD19-GFP和K562-CD20-GFP。另外还构建了同时表达luciferase和GFP的CD19和CD20双阳性的Nalm6-Luc-GFP细胞。流式细胞术检测结果（图3）显示，3种靶细胞的luciferase表达阳性率分别为99.9%、99.3%和99.9%。通过单克隆筛选，本实验获得GFP阳性细胞系。图3 成功构建分别表达CD19、CD20或luciferase及GFP的靶细胞系

成功构建分别表达CD19、CD20或luciferase及GFP的靶细胞系


本文编号：3543492