PI3激酶在KIT二次突变介导的耐药中的作用研究

发布时间：2021-12-22 09:14

　　目的:探讨PI3激酶在KIT二次突变介导的胃肠间质瘤靶向治疗耐药中的作用。方法:通过点突变在逆转录病毒载体上构建胃肠间质瘤中常见的KIT一次突变和二次突变的表达质粒,转染包装细胞,然后用包装细胞分泌的病毒感染BaF3细胞建立稳定表达KIT的细胞系。用PI3激酶抑制剂以及KIT抑制剂干预KIT表达细胞,检测KIT及其下游信号通路的活化。活细胞计数法和凋亡细胞检测试剂盒检测KIT表达细胞在抑制剂干预下的增殖和存活,以阐明PI3激酶在KIT二次突变介导的靶向治疗耐药中的作用。结果:1.KIT二次突变显著增强了其自身的活化;2.PI3激酶与KIT的结合对KIT二次突变的自活化起关键作用,并且该作用不被PI3激酶抑制剂所抑制;3.在失去与PI3激酶的结合后,KIT二次突变的活化对胃肠间质瘤靶向治疗药物伊马替尼的敏感性显著增加;4.在失去与PI3激酶的结合后,KIT二次突变介导的细胞增殖和存活被伊马替尼抑制。结论:1.PI3激酶在耐药性胃肠间质瘤携带的KIT二次突变的活化及其介导的细胞存活和增殖、以及对靶向药物伊马替尼的反应性起关键作用;2.PI3激酶可能成为治疗耐药性胃肠间质瘤良好的靶点。 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

将稳定表达的KIT突变的BaF3细胞洗涤，并在RPMI1640培养基中饥饿4小时，然后用100ng/mlSCF刺激2分钟，将KitC1用于从细胞裂解物中沉淀出KIT，然后通过SDS-PAGE分离

对照组 6 0.010±0.021 0.042±0.051 0.131±0.071 1.844±0.148 1.285±0.253 0.733±0.180干预组 6 1.000±0.000 0.860±0.184 0.500±0.043 1.772±0.363 1.957±0.497 0.935±0.201表 2-2 PI3 激酶与 KIT 二次突变的关系（X ±S）突变 组数A502Y503dup/N822KA502Y503dup/N822KA502Y503dup/N822K/M724A对照组 3 1.178±0.064 0.850±0.127 0.474±0.068干预组 3 1.000±0.000 1.163±0.042 0.693±0.245

宁夏医科大学硕士研究生学位论文结果23图6洗涤稳定表达KIT突变体的BaF3细胞，在PI3激酶抑制剂Copanlisib（50nM）存在的情况下，在RPMI1640培养基中加入不同浓度的Imatinib饥饿4小时。然后使用KitC1从细胞裂解物中沉淀出KIT。pY抗体4G10和KitC1用于检测KIT激活。量化并计算信号强度以显示相对KIT激活，P<0.05。我们分别用不同浓度的伊马替尼和PI3激酶抑制剂Copanlisib处理表达KIT二次突变A502_Y503dup/V65A和A502_Y503dup/N822K的两个细胞系，通过检测KIT的活化说明：随着伊马替尼药物浓度的升高，KIT二次突变的活化水平逐渐下降，而PI3激酶抑制剂Copanlisib对KIT二次突变的活化没有影响，说明PI3激酶抑制剂不能抑制KIT二次突变的活化。1.5Imatinib与PI3激酶抑制剂对KIT二次突变没有协同抑制作用

【参考文献】：
期刊论文
[1]Management of early asymptomatic gastrointestinal stromal tumors of the stomach[J]. Hans Scherübl,Siegbert Faiss,Wolfram-Trudo Knoefel,Eva Wardelmann.  World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 2014(07)



本文编号：3546149