人miR-489靶向p38α诱导肿瘤细胞自噬

发布时间：2021-12-22 06:58

　　癌症是目前威胁人类健康的重大疾病之一,其发病率逐年升高,并有年轻化的趋势。传统的治疗方式如手术、放疗和化疗等,并不能彻底根治肿瘤。近来,越来越多的研究表明在多种类型的肿瘤中存在肿瘤干细胞,这些细胞在肿瘤的发生、发展、抵抗放疗和化疗以及转移与复发中起到重要的作用。有研究表明miRNAs与肿瘤的增殖,干细胞与肿瘤干细胞的分化与自我更新等生物学功能相关。其中miR-489降低了卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3经顺铂处理后的存活率,在小鼠中,其通过靶向DEK调控小鼠肌肉干细胞静息;此外miR-128通过靶向Bmi-1降低神经胶质瘤干细胞的增殖水平等。对miRNA在肿瘤中的调控机制的研究,对肿瘤的治疗具有重要的意义。由于miR-489在小鼠中参与了干细胞静息的调控,本研究选取miR-489作为我们的研究对象,开展了其在肿瘤细胞中的功能研究。研究发现miR-489能够在人纤维肉瘤细胞株HT1080中引发自噬,并且证实了p38a做为miR-489的靶基因,参与了这种自噬的调控过程。过表达了miR-489后,细胞内的p38a, DEK蛋白水平降低,p53的蛋白水平升高。进一步我们通过过表达p38a ... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：128 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
缩略词和术语表
第一章 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 miRNA的产生及其功能
        1.1.2 miR-489的研究现状
        1.1.3 p38α的研究现状
        1.1.4 自噬概述
        1.1.5 肿瘤干细胞概述
    1.2 展望
    1.3 研究目的、方法、意义
第二章 人miR-489能够在癌细胞中诱导细胞自噬
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 主要试剂
        2.2.3 主要仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养及病毒转染
        2.3.2 小RNA抽提
        2.3.3 cDNA的合成
        2.3.4 miR-489的RT-PCR检测
        2.3.5 总蛋白抽提
        2.3.6 Western blotting
        2.3.7 细胞免疫荧光
        2.3.8 miRNA靶基因预测方法
        2.3.9 双荧光素酶报告系统
    2.4 实验结果
        2.4.1 人纤维肉瘤HT1080细胞中miR-489的过表达
        2.4.2 人纤维肉瘤HT1080细胞中miR-489转染后导致自噬上升
        2.4.3 在人纤维肉瘤细胞HT1080中miR-489调控AMPK/mTOR非依赖的自噬
        2.4.4 人miR-489与p38α存在结合活性
        2.4.5 人纤维肉瘤HT1080细胞中miR-489靶向p38α
    2.5 小结与讨论
第三章 人miR-489调控自噬的信号通路分析
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 主要试剂
        3.2.3 主要仪器
    3.3 方法
        3.3.1 细胞培养及病毒转染
        3.3.2 总蛋白抽提取
        3.3.3 Western blotting
        3.3.4 细胞免疫荧光
    3.4 结果
        3.4.1 人纤维肉瘤HT1080细胞中miR-489影响DEK和p53蛋白
        3.4.2 人纤维肉瘤HT1080细胞中p38α调控细胞自噬的途径
        3.4.3 人纤维肉瘤HT1080细胞中DEK调控细胞自噬的途径
    3.5 小结与讨论
第四章 在胃癌干细胞中,人miR-489对自噬的调控
    4.1 引言
    4.2 材料
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 主要试剂
        4.2.3 主要仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 胃癌干细胞分选
        4.3.2 肿瘤球的无血清培养
        4.3.3 肿瘤球的传代
        4.3.4 细胞培养及病毒转染
        4.3.5 总蛋白抽提取
        4.3.6 Western blotting
        4.3.7 细胞免疫荧光
        4.3.8 基质胶三维培养
        4.3.9 石蜡切片
        4.3.10 苏木精伊红染色
    4.4 结果
        4.4.1 胃癌干细胞的分选
        4.4.2 肿瘤干细胞的干性验证
        4.4.3 胃癌干细胞中miR-489调控p38α导致自噬升高
        4.4.4 转染miR-489后胃癌干细胞的成球率下降
    4.5 小结与讨论
第五章 胃癌干细胞的静息和自噬特征分析
    5.1 引言
    5.2 材料
        5.2.1 实验材料
        5.2.2 主要试剂
        5.2.3 主要仪器
    5.3 实验方法
        5.3.1 PKH26染色
        5.3.2 石蜡切片
        5.3.3 石蜡切片的免疫荧光检测
    5.4 结果
        5.4.1 静息胃癌干细胞的标记和鉴定
        5.4.2 静息胃癌干细胞的自噬特征分析
        5.4.3 静息胃癌干细胞不响应AMPK/mTOR信号通路
    5.5 小结与讨论
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
附录1 常用试剂配制一览表
附录2 常用分子生物学方法
附录3 引物列表
附录4 人miR-489的靶基因预测
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Detection of tumor stem cell markers in pancreatic carcinoma cell lines[J]. Monika Olempska,Patricia Alice Eisenach,Ole Ammerpohl,Hendrik Ungefroren,Fred Fandrich,Holger Kalthoff.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2007(01)



本文编号：3545962