一个新的蛋白质去泛素化酶的鉴定以及功能研究

发布时间：2021-12-24 08:08

　　研究目的:组蛋白伴侣最初被认为是组蛋白的载体,随着研究的进一步深入,现在被认为是在组蛋白转运的各个阶段起着关键调节因子的作用。特定的组蛋白伴侣可以促进特定的组蛋白组装成核小体,这一过程是在新合成或者DNA修复过程中染色质重组的一个重要步骤,在DNA复制和修复过程中组蛋白伴侣对于染色质组装的调节起着非常重要的作用。H3-H4的组蛋白伴侣anti-silencing function1（ASF1）在染色质组装过程中起着非常关键的作用,虽然有报道称组蛋白伴侣ASF1A在包括乳腺癌在内的多种肿瘤组织中失调,但是ASF1A的丰度和功能是如何被调控的,其具体的分子机制尚不明确。Ubiquitin-specific peptidase 52/poly（A）nuclease 2（USP52/PAN2）是泛素特异性蛋白酶（USP）超家族的一个成员,它包括一个WD40重复结构域,一个泛素C端水解酶（UCH）结构域和一个属于DEDD超家族的C端RNA酶结构域。根据以前的研究,USP52在PAN2/PAN3脱腺苷化复合体中被描述为一个聚腺苷核酸酶,并且最近一篇报道称USP52是P-body（processin... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

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ASF1A相互作用蛋白鉴定(A).亲和纯化和质谱分析ASF1A相互作用蛋白复合物

27且其洗脱峰大小远远超过其单体本身的分子量。更重要的是，ASF1A的洗脱峰与USP52重叠的流出峰主要集中在第9到15流出样品中（图1.2A）。另外我们对细胞组分进行分离，将得到的细胞质以及细胞核部分分别进行免疫共沉淀实验，发现USP52能够特异性的与细胞质而非细胞核内的ASF1A进行相互作用（图1.2B），紧接着为了进一步明确ASF1A与USP52在细胞内的定位，我们采用免疫荧光染色发现二者主要是共同定位于细胞质内（图1.2C）。以上这些结果进一步支持了我们的观点，即ASF1A能够与USP52在体内存在相互作用，并且他们的相互作用是发生在细胞质内。图 1.2ASF1A 与 USP52 共定位于细胞质内 （A）从稳定表达 FLAG-ASF1A 的 HeLa 细胞中纯化出与 ASF1A 相互作用的蛋白复合物，利用快速蛋白质液相色谱法在 Superose 6 凝胶柱中分离出不同大小的蛋白复合物。将色谱洗脱液进行 IB 检测，孵育相应抗体。校准蛋白的洗脱位置的分子量大小如图所示。（B）利用 MCF-7 的不同细胞组分进行免疫共沉淀分析

天津医科大学博士学位论文 一、组蛋白伴侣ASF1A与USP52相互作用用（图 1.3C），同样的 USP52/WD40 能够与全长的 ASF1A 以及 ASF1A 的前 30个氨基酸发生直接相互作用（图 1.3D）。总的来说，这些结果证明了 USP52 的WD40 结构域以及 ASF1A 的前 30 个氨基酸是介导二者直接相互作用的结构域。


本文编号：3550126