急性髓系白血病中DOK6与LINC00324表达及甲基化研究

发布时间：2021-12-24 10:04

　　目的:探究酪氨酸蛋白激酶6下游（Downstream Of Tyrosine Kinase 6,DOK6）和基因间长链非编码RNA 324（Long Intergenic Non-Protein Coding RNA 00324,LINC00324）两者在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者中的表达及甲基化水平,并分析两者的临床意义及对白血病细胞株的生物学表型的影响。方法:本研究收集32名正常人、108名初诊成人AML患者的骨髓样本及相应临床数据作为研究对象。利用实时定量PCR（real-time quantitative PCR,qPCR）技术检测正常人和A ML患者骨髓样本中DOK6和LINC00324的相对表达水平。利用实时定量甲基化特异性P CR（real-time quantitative methylation-specific PCR,RQ-MSP）和非甲基化特异性PCR（u nmethylation-specific PCR,USP）技术检测正常人和AML患者骨髓样本中DOK6和LINC00324的启动子区甲基化水平。利用亚硫酸氢盐... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

lncRNA作用模式图[51]

急性髓系白血病中DOK6与LINC00324表达及甲基化研究8表达和差异甲基化水平，并可能在白血病细胞株中发挥抑癌作用[82]。因此，本实验旨在通过检测DOK6在AML中的表达水平及启动子区甲基化状态来探究其与白血病的临床特征的相关性以及其对患者预后的影响。1.2研究方案设计1.2.1研究对象选取及标本收集；1.2.2骨髓中的骨髓单个核细胞（bonemarrowmesenchymalcells，BMMNCs）的提取；1.2.3BMMNCs中细胞总RNA及DNA的提取；1.2.4总RNA逆转录合成cDNA，亚硫酸氢盐修饰基因组DNA；1.2.5设计并合成qPCR及MSP/USP/BSP引物；1.2.6qPCR检测AML患者及对照组中目标基因及ABL的表达水平；1.2.7RQ-MSP和BSP检测并验证目标基因的甲基化水平；1.2.8目标基因与AML患者临床特征及预后的相关性分析；1.2.9目标基因表达与其启动子区甲基化水平相关性分析；1.2.10白血病细胞株的去甲基化处理；主要技术路线图如下（图2）：图2主要技术路线图。Figure2Maintechnologyroadmap.

江苏大学硕士学位论文23Nx=（Ex）△CTx(control-sample)÷（EABL）△CTABL(control-sample)（3.1）注：x表示待检目的基因；E=10(-1/slope)，△CT指各检测基因的AML标本或对照标本的CT值与相应的作为参照的CT值的差值。3.1.2AML患者中DOK6表达的ROC曲线为了观察DOK6表达鉴别AML患者和正常人的能力，我们绘制了ROC曲线，详见图4。其AUC为0.741，95%置信区间（confidenceinterval，CI）为0.657-0.825，结果显示DOK6表达水平能有效鉴别AML和正常人（P<0.001）。3.1.3DOK6表达水平与AML患者临床参数相关性为了进一步分析DOK6表达水平与AML患者各项临床特征和实验室参数之间的关系。我们根据ROC曲线确定了cutoff值，并将该cutoff值作为截断点将总体AML病例分为DOK6低表达组和DOK6高表达组。其中高表达组29例，低表达组46例，统计分析显示高、低表达组在性别、血红蛋白（hemoglobin，Hb）含量、骨髓原始细胞比例、白细胞（whitebloodcells，WBC）、FAB亚型的分布、基因突变和染色体核型等方面均未观察到统计学差异（P>0.05，详见表4）。但是高表达组和低表达组间的年龄、PLT计数及治疗后完全缓解（completeremission，CR）方面存在差异，差异均有统计学意义（P<0.05，表4）。图3不同分类和FAB分型的AML患者中DOK6表达与对照组的差异。A：分类差异；B：分型差异。Figure3DifferencesinDOK6expressionbetweenAMLpatientswithdifferentclassificationsandFABtypescomparedwithcontrols.A:Differentclassifications;B:DifferentFABtypes.图4DOK6表达的受试者工作特征曲线。Figure4ROCcurveanalysisofDOK6expressionfordiscriminatingAMLpatientsfromcontrols.

【参考文献】：
期刊论文
[1]急性髓系白血病患者外周血白细胞长链基因间非编码RNA324（LINC00324）与免疫表型的相关性分析[J]. 刘奕,张洋洋,谢佳莹,鲍卫,谢彬彬,周吉成,曾麒燕.  细胞与分子免疫学杂志. 2019(09)
[2]DOK2对胃癌细胞生物学行为的影响及其与胃癌预后的关系[J]. 焦金霞,王永飞,李明,杨洋,张宁,邢象斌,马三梅.  中国细胞生物学学报. 2015(05)
[3]mRNA expression of DOK1-6 in human breast cancer[J]. Tamara Ghanem,James Bracken,Abdul Kasem,Wen G Jiang,Kefah Mokbel.  World Journal of Clinical Oncology. 2014(02)



本文编号：3550284