阿托伐醌对人结肠癌干细胞生物学行为的影响

发布时间：2021-12-28 11:12

　　结肠癌（Colon cancer）是世界上最常见的癌症之一。目前结肠癌治疗的主要方案是外科手术联用放化疗,然而仍有较多的患者术后出现肿瘤复发和转移。因此,探寻行之有效的治愈结肠癌的方法迫在眉睫。研究发现,肿瘤中存在数量极少但生命力极强,具有自我更新以及无限分化潜能的肿瘤干细胞（Cancer stem cells,CSCs）,参与肿瘤发生,转移和对传统放化疗的治疗抵抗。因此,靶向杀死肿瘤干细胞,或许是最终根治结肠癌的关键。现有的靶向肿瘤干细胞的实验研究包括手术及放化疗、免疫治疗、分化治疗、基于表观遗传特点、转运蛋白、细胞表面标记、信号通路、干细胞低氧微环境以及非编码RNA（Non-coding RNA,ncRNA）等的治疗,但临床尚无靶向肿瘤干细胞的诊疗方案,肿瘤干细胞真正走入临床依然举步维艰,一是其与普通干细胞的高度相似性;二是目前的靶向研究依旧停留于动物实验;三是肿瘤干细胞表面标志物迄今尚无统一标准;四是由于数量极少,杀伤肿瘤干细胞后并不会出现明显的肿瘤缩小等直观反映。因此,急需研发靶向肿瘤干细胞的新型药物,然而由于新药研发周期长、成本高、成功率较低,所以重新定位现有药物,“老药新用... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
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英文缩略词表
第1章 绪论
    1.1 结肠癌的简介
    1.2 肿瘤干细胞
        1.2.1 肿瘤干细胞及生物学特性
        1.2.2 肿瘤干细胞的分离
        1.2.3 肿瘤干细胞的鉴定
        1.2.4 肿瘤干细胞的治疗
    1.3 阿托伐醌
        1.3.1 阿托伐醌的结构与性质
        1.3.2 阿托伐醌的药理机制
        1.3.3 阿托伐醌的研究进展
        1.3.4 阿托伐醌临床前景
    1.4 实验立题依据
第2章 材料与试剂
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 Real-timePCR所用引物
    2.2 主要试剂配制
        2.2.1 磷酸盐缓冲液(PBS)的配制(10×)
        2.2.2 0.25 %胰酶-EDTA混合液配制(10×)
        2.2.3 bFGF或EGF因子的配制
        2.2.4 DMEM/F12培养液配制
        2.2.5 磁珠分选所用Buffer的配制
        2.2.6 磁珠分选用DNaseI的配制
        2.2.7 ATO储备液的配制
第3章 实验方法
    3.1 结肠癌干细胞的分离、培养及鉴定
        3.1.1 免疫磁珠法筛选EpCAM~+CD44~+HCT-116干细胞
        3.1.2 EpCAM~+CD44~+HCT-116细胞的培养
        3.1.3 EpCAM~+CD44~+HCT-116细胞的鉴定
    3.2 ATO对结肠癌细胞和结肠癌干细胞增殖的影响
        3.2.1 ATO对结肠癌细胞HCT-116增殖的影响
        3.2.2 ATO对结肠癌干细胞EpCAM~+CD44~+HCT-116增殖的影响
    3.3 ATO对结肠癌干细胞凋亡的影响
        3.3.1 AnnexinV-FITC/PI法检测细胞凋亡
        3.3.2 线粒体膜电位检测(JC-1)
        3.3.3 Real-timePCR检测凋亡相关基因的表达
    3.4 ATO对结肠癌干细胞侵袭能力的影响
        3.4.1 Tanswell小室检测细胞侵袭能力
        3.4.2 Real-timePCR检测侵袭相关基因的表达
    3.5 ATO对结肠癌干细胞周期的影响
    3.6 统计学分析
第4章 实验结果
    4.1 结肠癌干细胞的分离、培养及鉴定
        4.1.1 EpCAM~+CD44~+HCT-116细胞的筛选
        4.1.2 EpCAM~+CD44~+HCT-116细胞的培养
        4.1.3 EpCAM~+CD44~+HCT-116细胞的鉴定
    4.2 ATO对结肠癌细胞和结肠癌干细胞增殖的影响
        4.2.1 ATO对结肠癌细胞HCT-116增殖的影响
        4.2.2 ATO对结肠癌干细胞EpCAM~+CD44~+HCT-116增殖的影响
    4.3 ATO对结肠癌干细胞凋亡的影响
        4.3.1 AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡
        4.3.2 线粒体膜电位法(JC-1)检测细胞凋亡
        4.3.3 Real-timePCR检测凋亡相关基因的表达
    4.4 ATO对结肠癌干细胞侵袭能力的影响
        4.4.1 Tanswell小室检测细胞侵袭能力
        4.4.2 Real-timePCR检测侵袭相关基因的表达
    4.5 ATO对结肠癌干细胞周期的影响
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
作者简介及攻读学位期间发表研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]乏氧与肿瘤干细胞干性、异质性和血管生成的关系[J]. 郭秀伟,张培彤.  中国肿瘤. 2017(12)
[2]OE19肿瘤干细胞的无血清分离培养以及肿瘤干细胞特性的鉴定[J]. 尹晓然,冯诚,马一楠,高晓燕,刘欣,贾丽君,张寅斌,张军.  山西医科大学学报. 2017(08)
[3]蝎毒多肽逆转白血病干细胞多药耐药作用的研究[J]. 杨向东,王兴丽,杨文华,赵磊,颜田赅.  中国中药杂志. 2016(24)
[4]急性髓细胞白血病的表观遗传学异常改变及其靶向治疗的研究进展[J]. 把环环,刘心.  国际输血及血液学杂志. 2016 (05)
[5]舌鳞状细胞癌和肿瘤干细胞的研究进展[J]. 韦雪柳,姚金光.  右江医学. 2016(03)
[6]肿瘤干细胞分离方法研究进展[J]. 李丹青,何跃东.  华西医学. 2015(07)
[7]Epigenetic therapy of cancer stem and progenitor cells by targeting DNA methylation machineries[J]. Patompon Wongtrakoongate.  World Journal of Stem Cells. 2015(01)
[8]Noncoding RNAs in cancer and cancer stem cells[J]. Tianzhi Huang,Angel Alvarez,Bo Hu,Shi-Yuan Cheng.  Chinese Journal of Cancer. 2013(11)
[9]肿瘤干细胞分离方法的研究进展[J]. 温超海,朱睿颖,杨渊.  广西中医药大学学报. 2012(04)
[10]肿瘤干细胞中的重要信号通路[J]. 毛骏,孙铭娟,王梁华,焦炳华.  生命的化学. 2012(06)

硕士论文
[1]阿托伐醌类似物的设计、合成及其抗肿瘤活性研究[D]. 朱侃.南京师范大学 2011



本文编号：3553957