基于Cre/LoxP系统tTA转基因小鼠构建及应用

发布时间：2021-12-29 15:05

　　肿瘤对人类生命和健康造成了重大威胁，而转基因小鼠已成为研究各种肿瘤形成机制的有力工具。联合应用四环素诱导系统和Cre/LoxP系统的高效且无毒的诱导基因表达调控系统是近年来发展起来的。其应用在转基因小鼠上，实现了对外源基因时空表达的可控，使得小鼠肿瘤模型更接近实际情况,更高效地解析肿瘤的发生机制。人类肿瘤中最常见的癌基因异常是ras基因突变,其中对人类影响较大的是K-ras基因突变。为深入研究K-ras基因突变致癌的发生机制，以期达到治疗肿瘤的目的，需精确调控K-ras突变基因的时空表达，建立合适的肿瘤模型。在实验室已有的四环素诱导系统的反应元件TRE-Kras-G12D小鼠前提下，需要再构建调控元件转基因小鼠，通过这两种小鼠交配所得双阳性小鼠，诱导Kras G12D蛋白的表达。而本文的主要工作就是基于Cre/LoxP和四环素诱导系统原理，构建出可潜在高表达tTA蛋白的CL-tTA转基因小鼠，可作为实验室的转基因工具鼠，为构建不同癌基因肿瘤模型打下基础。本文主要是通过分子生物学常用技术构建pClkhl-tTA-IRES-GFP重组质粒，电转ES细胞，用潮霉素B和他莫昔芬筛选出高表达的E... 

【文章来源】：山东师范大学山东省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pWPI-tTA质粒双酶切电泳图

M 1 2 6 23图 2-3 pClkhl-tTA-IRES-GFP 和 pClhl-tTA-IRES-GFP 质粒菌落 PCR 图用 T4 连接酶处理 tTA 片段与线性化 pClhl-IRES-GFP 和 pClkhl- IRES-GFP 片段，后，用引物 ptTA-R 和 ptTA-F 进行菌落 PCR 鉴定。PCR 所得片段大小为 250bp 左24 个克隆里得到 3 个 pClkhl-tTA-IRES-GFP 阳性克隆和 1 个 pClhl-tTA-IRES-GFP 阳。选 2 号和 23 号用到克隆进行扩大培养，以备进一步测序鉴定。 pClkhl-tTA-IRES-GFP 和 pClhl-tTA-IRES-GFP 质粒测序将两个克隆提取质粒，送到公司测序，测序结果与质粒图谱序列比对一致。 电转所需片段的获取

图3-1两种目的片段克隆总数柱状

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3556366