miRNA-21/PTEN/mTOR通路在原花青素抑制砷致L-02细胞恶性增殖中的作用
发布时间：2022-01-09 12:10
目的:砷（Arsenic,As）可以通过调控miRNA-21基因的表达,改变PTEN/mTOR通路的活性来影响肝细胞的增殖;原花青素（Grape seed proanthocyanidin extract,GSPE）能够清除细胞内过多的ROS来维持细胞内的氧化还原平衡体系进而抑制砷对肝细胞造成的氧化应激毒性。但目前关于原花青素能否通过miRNA-21/PTEN/mTOR通路抑制砷对肝细胞造成的恶性增殖的研究仍然未见报道。因此,本研究利用原花青素和砷对L-02细胞进行干预,探讨原花青素对砷诱导L-02细胞增殖的抑制效果以及miRNA-21/PTEN/mTOR通路在原花青素抑制砷致肝细胞恶性增殖中的作用,为完善原花青素的作用机制提供理论依据。方法:本次实验采用L-02细胞作为实验对象,利用As3+（2μmol/L）,GSPE（50mg/L）,miRNA-21 inhibitor及PTEN siRNA干预细胞24h后,检测miRNA-21、mTOR、PTEN、PI3K、AKT及PCNA、Ki-67的转录水平和翻译水平;CCK-8分析细胞活性;使用Transwell实验阐...
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度NaAsO2处理肝L-02细胞24小时后对细胞形态的影响
miRNA-21/PTEN/mTOR通路在原花青素抑制砷致肝L-02细胞恶性增殖中的作用161.2不同浓度GSPE对肝L-02细胞形态的影响使用0、25、50、75mg/L的GSPE处理肝L-02细胞24小时，观察不同浓度GSPE对肝L-02细胞形态学的影响。结果发现，在对照组中肝L-02细胞形态呈菱形，多边形，细胞周围有若干突起，交错排列生长，如图2中绿圈所示。在25、50mg/LGSPE处理下，肝L-02细胞形态仍然呈菱形、多边形生长，且相互之间交错排列。在75mg/LGSPE处理下，肝L-02细胞形态由菱形或多边形变为椭圆形或者不规则的形状，细胞周围的突起消失不见，且显微镜下观察到细胞量相较于正常情况下更少。图2.不同浓度GSPE处理肝L-02细胞24小时后对细胞形态的影响注：绿圈所示细胞形态结构正常；红圈所示细胞形态结构异常，发生明显改变。
miRNA-21/PTEN/mTOR通路在原花青素抑制砷致肝L-02细胞恶性增殖中的作用19注：*与对照组相比差异有统计学意义，P<0.05。图3.不同浓度NaAsO2对肝L-02细胞活性影响的时间反应关系注：表示和0时刻相比有统计学差异，P<0.05。2.3不同浓度NaAsO2对肝L-02细胞活性影响的剂量反应关系如图4所示，实验中使用不同浓度的NaAsO2分别处理细胞0、6、12、24、48小时，观察在不同时间点下，不同剂量NaAsO2对肝L-02细胞活性影响的作用浓度和处理时间之间的关系。结果表明，与对照组(100.787±11.505)的细胞活性相比，在2μmol/L(146.866±2.957)、4μmol/L(133.772±3.518)、6μmol/L(129.384±1.854)NaAsO2处理肝L-02细胞24h后，细胞活性明显增强(P<0.05)，但是升高的趋势不如2μmol/LNaAsO2处理后明显。有趣的是，我们发现10μmol/LNaAsO2(83.114±6.925)处理肝L-02细胞24h后与对照组(100.787±11.505)相比细胞活性明显减弱(P<0.05)，我们也发现当6μmol/L(102.442±8.668)、8μmol/L(94.129±11.654)、10μmol/L(85.048±13.378)As处理细胞48小时后与对照组(120.064±15.075)相比也可以降低肝L-02细胞的活性(P<0.05)。以上结果表明，2μmol/LNaAsO2处理肝L-02细胞24小时后可以使细胞活性升高，较高浓度NaAsO2处理肝L-02细胞24、48小时后可以使细胞活性降低。表3.不同浓度NaAsO2对肝L-02细胞活性影响的剂量反应关系Time(h)Dose(μmol/L)0246810098.722±4.844105.407±22.721107.677±14.90095.850±16.17488.792±19.32882.616±16.0806109.793±17.678116.408±23.256124.443±28.101112.605±18.17693.805±27.39789.127±15.16112109.337±6.527111.167±24.467117.410±29.398119.407±26.600101.275±7.79785.319±16.43424100.787±11.505146.86
【参考文献】：
期刊论文
[1]葡萄籽原花青素对高脂高糖饮食诱导代谢综合征大鼠干预作用[J]. 张艳华,汪雄,王文利,张雷,车会莲,张雅丽. 食品科学. 2020(01)
[2]葡萄籽原花青素对中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤的保护作用[J]. 李桂双,卜洁琼,龙剑文. 中国麻风皮肤病杂志. 2018(10)
[3]硅灰和六偏磷酸钠对氯氧镁水泥耐水性影响的数学建模和微观分析[J]. 张婷婷,孙延杰. 建材技术与应用. 2018(02)
[4]27-羟基胆固醇在神经细胞和星形胶质细胞共培养中的毒性作用[J]. 王慧,肖荣,麻微微,席元第,卢言慧,荣红国,安宇. 毒理学杂志. 2017(01)
[5]氯化锰诱导原代星形胶质细胞的过度活化[J]. 董莉莎,李学会,刘文丽,赵鹏,姚碧云,周宗灿. 毒理学杂志. 2016(01)
[6]葡萄籽原花青素对顺铂导致H9c2细胞毒性的保护作用[J]. 郭培培,郭卓雨,赵艳萌,高丽萍. 食品科学. 2014(03)
[7]中国饮水型砷中毒区的水化学环境与砷中毒关系[J]. 汤洁,卞建民,李昭阳,王农,张楠,张豪. 生态毒理学报. 2013(02)
本文编号：3578694
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度NaAsO2处理肝L-02细胞24小时后对细胞形态的影响
miRNA-21/PTEN/mTOR通路在原花青素抑制砷致肝L-02细胞恶性增殖中的作用161.2不同浓度GSPE对肝L-02细胞形态的影响使用0、25、50、75mg/L的GSPE处理肝L-02细胞24小时，观察不同浓度GSPE对肝L-02细胞形态学的影响。结果发现，在对照组中肝L-02细胞形态呈菱形，多边形，细胞周围有若干突起，交错排列生长，如图2中绿圈所示。在25、50mg/LGSPE处理下，肝L-02细胞形态仍然呈菱形、多边形生长，且相互之间交错排列。在75mg/LGSPE处理下，肝L-02细胞形态由菱形或多边形变为椭圆形或者不规则的形状，细胞周围的突起消失不见，且显微镜下观察到细胞量相较于正常情况下更少。图2.不同浓度GSPE处理肝L-02细胞24小时后对细胞形态的影响注：绿圈所示细胞形态结构正常；红圈所示细胞形态结构异常，发生明显改变。
miRNA-21/PTEN/mTOR通路在原花青素抑制砷致肝L-02细胞恶性增殖中的作用19注：*与对照组相比差异有统计学意义，P<0.05。图3.不同浓度NaAsO2对肝L-02细胞活性影响的时间反应关系注：表示和0时刻相比有统计学差异，P<0.05。2.3不同浓度NaAsO2对肝L-02细胞活性影响的剂量反应关系如图4所示，实验中使用不同浓度的NaAsO2分别处理细胞0、6、12、24、48小时，观察在不同时间点下，不同剂量NaAsO2对肝L-02细胞活性影响的作用浓度和处理时间之间的关系。结果表明，与对照组(100.787±11.505)的细胞活性相比，在2μmol/L(146.866±2.957)、4μmol/L(133.772±3.518)、6μmol/L(129.384±1.854)NaAsO2处理肝L-02细胞24h后，细胞活性明显增强(P<0.05)，但是升高的趋势不如2μmol/LNaAsO2处理后明显。有趣的是，我们发现10μmol/LNaAsO2(83.114±6.925)处理肝L-02细胞24h后与对照组(100.787±11.505)相比细胞活性明显减弱(P<0.05)，我们也发现当6μmol/L(102.442±8.668)、8μmol/L(94.129±11.654)、10μmol/L(85.048±13.378)As处理细胞48小时后与对照组(120.064±15.075)相比也可以降低肝L-02细胞的活性(P<0.05)。以上结果表明，2μmol/LNaAsO2处理肝L-02细胞24小时后可以使细胞活性升高，较高浓度NaAsO2处理肝L-02细胞24、48小时后可以使细胞活性降低。表3.不同浓度NaAsO2对肝L-02细胞活性影响的剂量反应关系Time(h)Dose(μmol/L)0246810098.722±4.844105.407±22.721107.677±14.90095.850±16.17488.792±19.32882.616±16.0806109.793±17.678116.408±23.256124.443±28.101112.605±18.17693.805±27.39789.127±15.16112109.337±6.527111.167±24.467117.410±29.398119.407±26.600101.275±7.79785.319±16.43424100.787±11.505146.86
【参考文献】：
期刊论文
[1]葡萄籽原花青素对高脂高糖饮食诱导代谢综合征大鼠干预作用[J]. 张艳华,汪雄,王文利,张雷,车会莲,张雅丽. 食品科学. 2020(01)
[2]葡萄籽原花青素对中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤的保护作用[J]. 李桂双,卜洁琼,龙剑文. 中国麻风皮肤病杂志. 2018(10)
[3]硅灰和六偏磷酸钠对氯氧镁水泥耐水性影响的数学建模和微观分析[J]. 张婷婷,孙延杰. 建材技术与应用. 2018(02)
[4]27-羟基胆固醇在神经细胞和星形胶质细胞共培养中的毒性作用[J]. 王慧,肖荣,麻微微,席元第,卢言慧,荣红国,安宇. 毒理学杂志. 2017(01)
[5]氯化锰诱导原代星形胶质细胞的过度活化[J]. 董莉莎,李学会,刘文丽,赵鹏,姚碧云,周宗灿. 毒理学杂志. 2016(01)
[6]葡萄籽原花青素对顺铂导致H9c2细胞毒性的保护作用[J]. 郭培培,郭卓雨,赵艳萌,高丽萍. 食品科学. 2014(03)
[7]中国饮水型砷中毒区的水化学环境与砷中毒关系[J]. 汤洁,卞建民,李昭阳,王农,张楠,张豪. 生态毒理学报. 2013(02)
本文编号：3578694
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