DCC-2036对结肠癌LoVo细胞增殖、侵袭及迁移的抑制作用
发布时间：2022-01-10 17:33
目的:明确DCC-2036对结肠癌LoVo细胞增殖、侵袭、迁移的抑制作用。方法:体外实验,实验以结肠癌细胞LoVo细胞系作为研究模型;用流式技术来检测DCC-2036处理后LoVo细胞凋亡的改变;用克隆形成实验来检测DCC-2036处理后LoVo细胞增殖能力的改变;用Transwell实验来检测DCC-2036处理后LoVo细胞侵袭能力的改变;用划痕实验来检测DCC-2036处理后LoVo细胞迁移能力的改变;使用Western Blotting检测DCC-2036处理后LoVo细胞EMT标志物的改变;体内实验,实验以LoVo细胞移植成瘤的裸鼠作为研究模型,通过测量和统计分析瘤体大小变化来检测DCC-2036药物处理后移植瘤的增长差异;通过HE染色及免疫组化来检测DCC-2036给药处理后移植瘤镜下形态和增殖指标的差异。结果:1.通过MTS实验证明了DCC-2036能够抑制LoVo细胞的细胞活力。2.通过Annexin V-FITC/PI双染流式检测表明DCC-2036能够诱导LoVo细胞的凋亡。3.通过克隆形成实验,证明了DCC-2036能够明显的抑制LoVo细胞的增殖能力。4.通过T...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
调亡诱导实验证实DCC-2036能显著诱导LoVo细胞的凋亡
16图2调亡诱导实验证实DCC-2036能显著诱导LoVo细胞的凋亡。注：上图为三次独立实验的代表性图。梯度浓度（0-5.0μM）的DCC-3026处理细胞48h，再用AnnexinV-FITC/PI双染流式检测计数来检测细胞调亡情况。右上象限是晚期凋亡细胞。3.3DCC-2036对LoVo细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响3.3.1DCC-2036抑制LoVo细胞克隆形成通过克隆形成实验来验证DCC-2036对LoVo细胞长期增殖能力的影响，结果显示：DCC-2036（2.5μMol）处理组LoVo细胞的克隆形成数目和体积均显著少于不加药组，其差异具有统计学意义（P<0.001）（图3.1）。DCC-2036能明显抑制LoVo细胞的增殖能力。图3.1克隆形成实验验证DCC-2036明显LoVo细胞的克隆形成。注：对照组0umol，处理组2.5umolDCC-2036处理48h；图左侧为三次克隆形成独立实验的代表图;使用ImageJ软件进行克隆计数；图右侧为统计图。使用t检验进行统计分析，***代表P值<0.001。
173.3.2DCC-2036抑制LoVo细胞的侵袭能力为了进一步研究DCC-2036对LoVo细胞的侵袭能力是否有抑制作用，通过Transwell实验证实，DCC-2036处理组LoVo细胞的侵袭能力下降，显微镜下可见加药组穿膜细胞数目较对照组明显偏少，其差异具有统计学意义（P<0.001）（图3.2）。结果表明DCC-2036能够明显抑制结肠癌LoVo细胞的侵袭能力。图3.2Transwell实验验证DCC-2036能够明显抑制LoVo细胞侵袭能力(100x)。注：选取细胞密度6.0×105cell的LoVo细胞进行实验，，加药组2.5μmolDCC-2036处理48h；图左，三次独立的Transwell实验的侵袭细胞的代表性图像；使用ImageJ统计穿膜细胞数目；图右，柱状图，显示了来自三个独立实验侵袭细胞的百分比；使用t检验进行统计分析，***P<0.001。3.3.3DCC-2036抑制LoVo细胞的迁移能力划痕实验可用于检测细胞迁移能力，为了探究DCC-2036对LoVo细胞迁移能力的影响，我们通过划痕实验来进行观察。结果显示，0~48小时对照及加药组的划痕宽度均有所缩小，但明显可见加药组的划痕愈合趋势较对照组弱（图3.3A）；0~48小时加药组的细胞迁移能力较对照组下降，其细胞的愈合距离明显低于对照组，差异具有统计学意义（图3.3B，P<0.05）,说明DCC-2036抑制了LoVo细胞的迁移能力。
【参考文献】：
期刊论文
[1]多种人结肠癌5-氟尿嘧啶耐药细胞株的建立及耐药机制初步研究[J]. 刘蒙,黄晓东,韩峥,朱庆曦,谭洁,刘维洁,陈巍,邹艳丽,田霞. 中国普通外科杂志. 2019(10)
[2]抗血管生成小分子TKI在晚期结直肠癌中的进展[J]. 陈杨,石燕,戴广海. 中国研究型医院. 2017(04)
[3]Colorectal cancer:Metastases to a single organ[J]. Sina Vatandoust,Timothy J Price,Christos S Karapetis. World Journal of Gastroenterology. 2015(41)
[4]How to select the optimal treatment for first line metastatic colorectal cancer[J]. Alexander Stein,Carsten Bokemeyer. World Journal of Gastroenterology. 2014(04)
[5]结肠癌耐药细胞株LoVo/L-OHP的建立及其耐药机制[J]. 李敏,方明治. 现代肿瘤医学. 2011(10)
硕士论文
[1]DCC-2036对三阴性乳腺癌细胞增殖及侵袭的作用及机制[D]. 陈锡光.南华大学 2019
本文编号：3581123
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
调亡诱导实验证实DCC-2036能显著诱导LoVo细胞的凋亡
16图2调亡诱导实验证实DCC-2036能显著诱导LoVo细胞的凋亡。注：上图为三次独立实验的代表性图。梯度浓度（0-5.0μM）的DCC-3026处理细胞48h，再用AnnexinV-FITC/PI双染流式检测计数来检测细胞调亡情况。右上象限是晚期凋亡细胞。3.3DCC-2036对LoVo细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响3.3.1DCC-2036抑制LoVo细胞克隆形成通过克隆形成实验来验证DCC-2036对LoVo细胞长期增殖能力的影响，结果显示：DCC-2036（2.5μMol）处理组LoVo细胞的克隆形成数目和体积均显著少于不加药组，其差异具有统计学意义（P<0.001）（图3.1）。DCC-2036能明显抑制LoVo细胞的增殖能力。图3.1克隆形成实验验证DCC-2036明显LoVo细胞的克隆形成。注：对照组0umol，处理组2.5umolDCC-2036处理48h；图左侧为三次克隆形成独立实验的代表图;使用ImageJ软件进行克隆计数；图右侧为统计图。使用t检验进行统计分析，***代表P值<0.001。
173.3.2DCC-2036抑制LoVo细胞的侵袭能力为了进一步研究DCC-2036对LoVo细胞的侵袭能力是否有抑制作用，通过Transwell实验证实，DCC-2036处理组LoVo细胞的侵袭能力下降，显微镜下可见加药组穿膜细胞数目较对照组明显偏少，其差异具有统计学意义（P<0.001）（图3.2）。结果表明DCC-2036能够明显抑制结肠癌LoVo细胞的侵袭能力。图3.2Transwell实验验证DCC-2036能够明显抑制LoVo细胞侵袭能力(100x)。注：选取细胞密度6.0×105cell的LoVo细胞进行实验，，加药组2.5μmolDCC-2036处理48h；图左，三次独立的Transwell实验的侵袭细胞的代表性图像；使用ImageJ统计穿膜细胞数目；图右，柱状图，显示了来自三个独立实验侵袭细胞的百分比；使用t检验进行统计分析，***P<0.001。3.3.3DCC-2036抑制LoVo细胞的迁移能力划痕实验可用于检测细胞迁移能力，为了探究DCC-2036对LoVo细胞迁移能力的影响，我们通过划痕实验来进行观察。结果显示，0~48小时对照及加药组的划痕宽度均有所缩小，但明显可见加药组的划痕愈合趋势较对照组弱（图3.3A）；0~48小时加药组的细胞迁移能力较对照组下降，其细胞的愈合距离明显低于对照组，差异具有统计学意义（图3.3B，P<0.05）,说明DCC-2036抑制了LoVo细胞的迁移能力。
【参考文献】：
期刊论文
[1]多种人结肠癌5-氟尿嘧啶耐药细胞株的建立及耐药机制初步研究[J]. 刘蒙,黄晓东,韩峥,朱庆曦,谭洁,刘维洁,陈巍,邹艳丽,田霞. 中国普通外科杂志. 2019(10)
[2]抗血管生成小分子TKI在晚期结直肠癌中的进展[J]. 陈杨,石燕,戴广海. 中国研究型医院. 2017(04)
[3]Colorectal cancer:Metastases to a single organ[J]. Sina Vatandoust,Timothy J Price,Christos S Karapetis. World Journal of Gastroenterology. 2015(41)
[4]How to select the optimal treatment for first line metastatic colorectal cancer[J]. Alexander Stein,Carsten Bokemeyer. World Journal of Gastroenterology. 2014(04)
[5]结肠癌耐药细胞株LoVo/L-OHP的建立及其耐药机制[J]. 李敏,方明治. 现代肿瘤医学. 2011(10)
硕士论文
[1]DCC-2036对三阴性乳腺癌细胞增殖及侵袭的作用及机制[D]. 陈锡光.南华大学 2019
本文编号：3581123
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3581123.html
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