不同p53状态下EphA2对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭作用的研究

发布时间：2022-01-11 23:12

　　目的食管癌是消化系统最具侵略性的恶性肿瘤之一,其特点是死亡率高,预后差。我国是食管癌的高发地区,食管鳞状细胞癌（ESCC）是我国食管癌发生的主要组织学亚型。由于早期症状不明显,临床上大多数患者往往一经诊断即为晚期,因此错过了手术机会,而以放化疗的治疗方式为主。因此,患者对化疗药物的应答尤为重要。EphA2是Eph受体超家族的成员,被发现在多种癌症中过表达,包括前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、胰腺癌、肺癌、食管癌等,是研究较为广泛的一个抗癌药物开发靶点。针对酪氨酸激酶的靶向药物达沙替尼和恩沙替尼对其也有着抑制作用。但近年来,随着研究的开展,发现EphA2在癌症中的作用缺乏一致性。有证据表明EphA2促进了上皮间质转化,敲低EphA2后抑制了癌症的转移和血管生成,也有文献报道EphA2能抑制致癌的Akt-mTORC1和RAS-ERK信号传导,敲低EphA2后表现出促进了癌细胞的生长、迁移和侵袭。这证明EphA2在癌症中具有双重作用,因此影响了相关靶向药物在临床的应用和疗效的判定。2001年,发现EphA2是p53家族（p53,p63和p73）的靶基因,确定了位于EphA2启动子中的p53反应元... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?ＥｐｈＡ２和ｐ５３在食管鳞癌组织中的表达情况

?实验结果???３．２?ＥｐｈＡ２和ｐ５３在食管鳞癌细胞中的表达情况??我们通过蛋白质免疫印迹的实验方法来检测食管鳞癌细胞中ｐ５３和ＥｐｈＡ２??的表达情况，确认了食管鳞癌细胞中的ｐ５３状态，同时也为后续实验所用细胞??系的筛选提供了依据。蛋白质免疫印迹结果图２显示，ｐ５３在ＫＹＳＥ３０、ＫＹＳＥ５１０、??Ｅｃａｌ０９中相对低表达，在ＫＹＳＥ１５０、ＫＹＳＥ４１０、ＫＹＳＥ４５０中相对高表达。和??之前报道?ＫＹＳＥ３０、ＫＹＳＥ５１０、Ｅｃａｌ０９?为?ｐ５３?野生型细胞，ＫＹＳＥ１５０、ＫＹＳＥ４１０、??ＫＹＳＥ４５０为ｐ５３突变型细胞相一致［２５＇２６］。同时，在ｐ５３野生型细胞ＫＹＳＥ３０、??ＫＹＳＥ５１０、Ｅｃａｌ０９?中，ＫＹＳＥ３０?和?Ｅｃａｌ０９?中?ＥｐｈＡ２?的表达相对较高，在?ｐ５３??突变型细胞?ＫＹＳＥ１５０、ＫＹＳＥ４１０、ＫＹＳＥ４５０?中，ＫＹＳＥ１５０?的?ＥｐｈＡ２?表达相对??较高。因此，在本实验中，选取ｐ５３状态不同，ＥｐｈＡ２表达相对较高的ＫＹＳＥ３０、??Ｅｃａｌ０９、ＫＹＳＥ１５０细胞来进行实验。??ｗ?Ｍ?Ｍ?Ｍ?ｗ?ｗ??ｐ５３?——５３ＫＤａ??ＥｐｈＡ２?￣?？屬■■？一?１２５ＫＤａ??ＧＡＰＤＨ?—３７ＫＤａ??图２?ｐ５３和ＥｐｈＡ２在食管鳞癌细胞中的表达情况??３．３敲低ＥｐｈＡ２对ｐ５３野生型食管鱗癌细胞增殖、侵袭、转移的影??响??３．３．１?ｐ５３野生型食管鱗癌敲低ＥｐｈＡ２的细胞稳株的建立及检测??用一组ｓｈＥｐｈＡ２慢病毒感染ｐ５３野生型并高表达ＥｐｈＡ２的ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９??２８??

?实验结果???Ｃ??Ｅｃａｌ０９???ｓｈＣｔｒｌ?ｓｈＥｐｈＡ２－ｌ?ｓｈＥｐｈＡ２－２?ｓｈＥｐｈＡ２－３??■?■■■??Ｄ??Ｅｃａｌ０９???ＥｐｈＡ２?ｍｍ?＊?？?＿?＿？一?１２５ＫＤａ??ＧＡＰＤＨ?—?３７ＫＤａ??图３敲低ＥｐｈＡ２的ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９细胞的检测。Ａ荧光显微镜下敲低ＥｐｈＡ２的ＫＹＳＥ３０??细胞拍照（比例尺５〇〇＾１１１１），８为以６３１６１１＾１〇１检测８１＾０１１八２慢病毒对反丫８￡３〇细胞的敲??低效率，Ｃ荧光显微镜下敲低ＥｐｈＡ２的Ｅｃａｌ０９细胞拍照（比例尺５００（ｉｍ）?，?Ｄ为Ｗｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ检测ｓｈＥｐｈＡ２慢病毒对Ｅｃａｌ０９细胞的敲低效率。??３．３．２敲低ＥｐｈＡ２促进了?ｐ５３野生型食管鱗癌细胞的增殖能力??肿瘤细胞不受正常生长调控系统的控制，能持续地分裂与增殖，无限增殖??是肿瘤细胞最基本的特点。为了研究ＥｐｈＡ２对ｐ５３不同状态的细胞的影响，我??们在ｐ５３野生型细胞ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９中敲低ＥｐｈＡ２，用ＣＣＫ－８法检测ＥｐｈＡ２??对ｐ５３野生型食管鳞癌细胞增殖的影响。ＣＣＫ－８实验结果表明：与对照组相比??用ｓｈＥｐｈＡ２－ｌ慢病毒感染ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９细胞后，敲低ＥｐｈＡ２的表达明显促??进了?ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９细胞的增殖，如图４所示。??３０??


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