CFIm25通过JNK/c-Jun和P38信号通路对肝癌增殖及侵袭转移影响的研究
发布时间：2022-01-12 16:16
目的:原发性肝癌是常见且凶险的恶性肿瘤之一,其发病率位居肿瘤第五位,相关死亡率位于第三位。肝癌发生发展是多基因、多因素相互协调作用的多阶段过程,其发生机制目前尚未完全阐明。因此,有必要深入研究肝癌分子生物学机制,寻找潜在的干预靶点。CFIm25是转录前修饰中选择性多聚腺苷酸化的“关键”因子,CFIm25的抑制可显著促进近端poly（A）位点剪切,逃逸负性调控以促进细胞增殖和转化。目前CFIm25只在神经胶质细胞瘤等极少疾病中有所研究,在肝癌中尚无研究报道。本研究拟探讨CFIm25在肝癌增殖及侵袭转移中的作用及分子机制。方法:通过实时定量PCR（RT-q PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）及免疫组织化学（IHC）的方法检测人肝癌及其癌旁组织中CFIm25的表达,并分析CFIm25的表达与肝癌手术病人临床病理特征及预后之间的关系;采用小干扰RNA片段（si RNA）沉默CFIm25表达;同时使用真核过表达载体质粒建立CFIm25过表达细胞株;通过平板克隆和CCK8实验检测高/低表达CFIm25后对肝癌细胞增殖能力的影响;而Transwell侵袭迁移实验和细胞划痕实验用于检测...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：117 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
选择性多聚腺苷酸化的示意图（图片来源：DiGiammartino,etal.MolCell.2011;43）
图 1、选择性多聚腺苷酸化的示意图（图片来源：Di Giammartino, et al. Mol Cell.2011;43）APA 过程需要众多因子的参与，包括剪切因子 I（CFIm）、剪切因子 II（CFIIm）、各剪切与腺苷酸化特异因子（CPSF）等。其中剪切因子 I 由 25 kD、59 kD 和 68 kD三个亚基组成，即CFIm25 (又称CPSF5或NUDT21)，CFIm59 (又称CPSF7)和CFIm68(也称 CPSF6)[22-24]。有研究证据显示，在 APA 过程中，CFIm25 发挥至关重要的 开关 作用[21]，可以显著阻遏近端 poly(A) 位点剪切。抑制 CFIm25 的表达可诱导至少 1450 个基因的 3·UTR 显著缩短，其中 64%表现出表达水平的显著增加[25]。研究同时推测，CFIm25 可能是一个新的抗癌基因，其在人类肿瘤中的表达水平下降[26, 27]。
-1 RT-PCR检测肝癌及其癌旁组织中 CFIm25 的 mRNA 表达水平（相比于癌旁组织，25 的表达更少，C：肝癌组织；N：癌旁组织，GAPDH作为内参）。stern blot 分析人肝癌及其癌旁组织中 CFIm25蛋白的表达水平应用 Western blot 分析人肝癌及其癌旁组织中 CFIm25 蛋白表达水平。癌组织中，我们筛选了符合组织蛋白提取要求的 35 对肝癌及其癌旁组 blot 检测，结果显示：23 对肝癌组织中 CFIm25 的蛋白表达水平明显低于织（23/32,71.88%），见图1-2。
【参考文献】：
期刊论文
[1]New advances in hepatocellular carcinoma[J]. Sonia Pascual,Iván Herrera,Javier Irurzun. World Journal of Hepatology. 2016(09)
[2]The hepatitis B virus-associated tumor microenvironment in hepatocellular carcinoma[J]. Pengyuan Yang,Geoffrey J.Markowitz,Xiao-Fan Wang. National Science Review. 2014(03)
[3]Current management of hepatocellular carcinoma[J]. Parissa Tabrizian,Sasan Roayaie,Myron E Schwartz. World Journal of Gastroenterology. 2014(30)
[4]Metastatic human hepatocellular carcinoma models in nude mice and cell line with metastatic potential[J]. Zhao-You Tang Fan-Xian Sun Jian Tian Sheng-Long Ye Yin-Kun Liu Kang-Da Liu Qiong Xue Jie Chen Jing-Lin Xia Lun-Xiu Qin Hui-Chuan Sun Lu Wang Jian Zhou Yan Li Zeng-Chen Ma Xin-Da Zhou Zhi-Quan Wu Zhi-Ying Lin Bing-Hui Yang Liver Cancer Institute of Fudan University and Zhongshan Hospital,Shanghai 200032,China. World Journal of Gastroenterology. 2001(05)
本文编号：3585082
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：117 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
选择性多聚腺苷酸化的示意图（图片来源：DiGiammartino,etal.MolCell.2011;43）
图 1、选择性多聚腺苷酸化的示意图（图片来源：Di Giammartino, et al. Mol Cell.2011;43）APA 过程需要众多因子的参与，包括剪切因子 I（CFIm）、剪切因子 II（CFIIm）、各剪切与腺苷酸化特异因子（CPSF）等。其中剪切因子 I 由 25 kD、59 kD 和 68 kD三个亚基组成，即CFIm25 (又称CPSF5或NUDT21)，CFIm59 (又称CPSF7)和CFIm68(也称 CPSF6)[22-24]。有研究证据显示，在 APA 过程中，CFIm25 发挥至关重要的 开关 作用[21]，可以显著阻遏近端 poly(A) 位点剪切。抑制 CFIm25 的表达可诱导至少 1450 个基因的 3·UTR 显著缩短，其中 64%表现出表达水平的显著增加[25]。研究同时推测，CFIm25 可能是一个新的抗癌基因，其在人类肿瘤中的表达水平下降[26, 27]。
-1 RT-PCR检测肝癌及其癌旁组织中 CFIm25 的 mRNA 表达水平（相比于癌旁组织，25 的表达更少，C：肝癌组织；N：癌旁组织，GAPDH作为内参）。stern blot 分析人肝癌及其癌旁组织中 CFIm25蛋白的表达水平应用 Western blot 分析人肝癌及其癌旁组织中 CFIm25 蛋白表达水平。癌组织中，我们筛选了符合组织蛋白提取要求的 35 对肝癌及其癌旁组 blot 检测，结果显示：23 对肝癌组织中 CFIm25 的蛋白表达水平明显低于织（23/32,71.88%），见图1-2。
【参考文献】：
期刊论文
[1]New advances in hepatocellular carcinoma[J]. Sonia Pascual,Iván Herrera,Javier Irurzun. World Journal of Hepatology. 2016(09)
[2]The hepatitis B virus-associated tumor microenvironment in hepatocellular carcinoma[J]. Pengyuan Yang,Geoffrey J.Markowitz,Xiao-Fan Wang. National Science Review. 2014(03)
[3]Current management of hepatocellular carcinoma[J]. Parissa Tabrizian,Sasan Roayaie,Myron E Schwartz. World Journal of Gastroenterology. 2014(30)
[4]Metastatic human hepatocellular carcinoma models in nude mice and cell line with metastatic potential[J]. Zhao-You Tang Fan-Xian Sun Jian Tian Sheng-Long Ye Yin-Kun Liu Kang-Da Liu Qiong Xue Jie Chen Jing-Lin Xia Lun-Xiu Qin Hui-Chuan Sun Lu Wang Jian Zhou Yan Li Zeng-Chen Ma Xin-Da Zhou Zhi-Quan Wu Zhi-Ying Lin Bing-Hui Yang Liver Cancer Institute of Fudan University and Zhongshan Hospital,Shanghai 200032,China. World Journal of Gastroenterology. 2001(05)
本文编号：3585082
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