CD44v6和HA在结直肠癌中的表达及其对顺铂耐药机制的研究
发布时间：2022-01-15 14:58
目的:本研究旨在通过对CD44v6、透明质酸（Hyaluronic acid,HA）在结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）中表达的检测,探究其对顺铂耐药性的影响,并对耐药机制做初步探索。方法:本研究共收集了66例经病理诊断为CRC的组织标本,采用实时荧光定量PCR（quantity Real-time PCR,qRT-PCR）,蛋白印迹法（western blot,WB）和免疫组织化学（immunohischemistry,IHC）的方法检测CD44v6的表达,分析了CD44v6表达与患者临床病理特征之间的相关性。同时培养CRC细胞系,在细胞系中使用qRT-PCR和western blot法检测CD44v6的表达。研究中通过人透明质酸酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunoassay,ELISA）来检测HA的表达;运用慢病毒转染CRC细胞系来敲减CD44v6基因,验证CD44v6与CRC耐药之间的关系,经过透明质酸酶（Hyaluronidase,HAase）消化CRC细胞系来阻断CD44v6和HA的结合探索CD44v6-HA复合体与CRC耐药之间的关...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CD44v6在CRC中的表达
16A：在CA和NORMAL中CD44v6基因表达的qRT-PCR结果。B：在HT29和RKO细胞中CD44v6基因的表达的qRT-PCR结果。C：在RKO和NCM460细胞中CD44v6基因表达的qRT-PCR结果，选择β-actin作为内参基因。D：在CA和NOEMAL中CD44v6蛋白表达的westernblot结果。E：在HT29和RKO细胞中CD44v6蛋白表达的westernblot结果。F：在RKO和NCM460细胞中CD44v6蛋白表达的westernblot结果。G：在CA和NORMAL中CD44v6蛋白相对表达的灰度分析。H：在HT29和RKO细胞中CD44v6蛋白相对表达的灰度分析。I：在RKO和NCM460细胞中CD44v6蛋白相对表达的灰度分析，内参蛋白为GAPDH。CA，CRC组织；NORMAL，结直肠粘膜组织；HT29和RKO，CRC细胞系；NCM460，结直肠上皮细胞系。**p<0.01,***p<0.001。图2.2CD44v6在CRC组织和结直肠粘膜组织中的表达（IHC）A：CD44v6在结直肠粘膜组织中阴性表达（×400）；B：CD44v6在CRC组织中弱阳性表达（×400）；C：CD44v6在CRC组织中阳性表达（×400）；D：CD44v6在CRC组织中强阳性表达（×400）。二、CD44v6与CRC患者临床病理之间的关系由IHC结果可知，CD44v6蛋白表达与血清中的CEA、CA125有统计学差异（表2.9）。由qRT-PCR结果可知，CD44v6基因表达与血清中的CEA、CA199和N分期有统计学差异（表2.10）。无论是IHC结果，还是qRT-PCR结果，CD44v6在CRC组织中的表达与患者的年龄、性别、TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤发生部位均无相关性。ABCD
21三、HA在HT-29、RKO、NCM460细胞中的分泌情况通过采用ELISA法检测HT29、RKO、NCM460细胞中内源性HA的表达水平，结果表明，在ELISA检测限内（0.05-10ng/mL），在RKO细胞中分泌HA，在HT29、NCM460细胞中未检测出HA的表达，结果如图2.3。图2.3在HT29，RKO，NCM460细胞中HA的分泌通过ELISA检测内源性HA在HT29，RKO和NCM460细胞系中的分泌情况。结果表明，在ELISA检测限（0.05-10ng/mL）内，在RKO细胞中检测到HA表达，而在HT29和NCM460细胞系中未检测到HA表达。***p＜0.001。
【参考文献】：
博士论文
[1]CD44v6在人结直肠癌化疗耐药中的作用和机制及在组织中的表达研究[D]. 刘海光.南方医科大学 2017
硕士论文
[1]条索状透明质酸在肿瘤细胞表面的表达及其在肿瘤化疗耐药中的作用初探[D]. 杨婉薇.苏州大学 2012
本文编号：3590819
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CD44v6在CRC中的表达
16A：在CA和NORMAL中CD44v6基因表达的qRT-PCR结果。B：在HT29和RKO细胞中CD44v6基因的表达的qRT-PCR结果。C：在RKO和NCM460细胞中CD44v6基因表达的qRT-PCR结果，选择β-actin作为内参基因。D：在CA和NOEMAL中CD44v6蛋白表达的westernblot结果。E：在HT29和RKO细胞中CD44v6蛋白表达的westernblot结果。F：在RKO和NCM460细胞中CD44v6蛋白表达的westernblot结果。G：在CA和NORMAL中CD44v6蛋白相对表达的灰度分析。H：在HT29和RKO细胞中CD44v6蛋白相对表达的灰度分析。I：在RKO和NCM460细胞中CD44v6蛋白相对表达的灰度分析，内参蛋白为GAPDH。CA，CRC组织；NORMAL，结直肠粘膜组织；HT29和RKO，CRC细胞系；NCM460，结直肠上皮细胞系。**p<0.01,***p<0.001。图2.2CD44v6在CRC组织和结直肠粘膜组织中的表达（IHC）A：CD44v6在结直肠粘膜组织中阴性表达（×400）；B：CD44v6在CRC组织中弱阳性表达（×400）；C：CD44v6在CRC组织中阳性表达（×400）；D：CD44v6在CRC组织中强阳性表达（×400）。二、CD44v6与CRC患者临床病理之间的关系由IHC结果可知，CD44v6蛋白表达与血清中的CEA、CA125有统计学差异（表2.9）。由qRT-PCR结果可知，CD44v6基因表达与血清中的CEA、CA199和N分期有统计学差异（表2.10）。无论是IHC结果，还是qRT-PCR结果，CD44v6在CRC组织中的表达与患者的年龄、性别、TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤发生部位均无相关性。ABCD
21三、HA在HT-29、RKO、NCM460细胞中的分泌情况通过采用ELISA法检测HT29、RKO、NCM460细胞中内源性HA的表达水平，结果表明，在ELISA检测限内（0.05-10ng/mL），在RKO细胞中分泌HA，在HT29、NCM460细胞中未检测出HA的表达，结果如图2.3。图2.3在HT29，RKO，NCM460细胞中HA的分泌通过ELISA检测内源性HA在HT29，RKO和NCM460细胞系中的分泌情况。结果表明，在ELISA检测限（0.05-10ng/mL）内，在RKO细胞中检测到HA表达，而在HT29和NCM460细胞系中未检测到HA表达。***p＜0.001。
【参考文献】：
博士论文
[1]CD44v6在人结直肠癌化疗耐药中的作用和机制及在组织中的表达研究[D]. 刘海光.南方医科大学 2017
硕士论文
[1]条索状透明质酸在肿瘤细胞表面的表达及其在肿瘤化疗耐药中的作用初探[D]. 杨婉薇.苏州大学 2012
本文编号：3590819
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