依他尼酸联合顺铂化疗促肺癌A549细胞凋亡的作用及机制研究

发布时间：2022-01-19 11:26

　　目的探讨依他尼酸（ethacrynic acid,EA）杀伤肺癌A549细胞球的作用及机制研究。方法无血清培养基中培养A549细胞球,应用Western blot检测CD133、SOX2、Ep CAM和ABCG2的蛋白表达水平。应用1、2、5、10、20 mg/m L的浓度顺铂（cisplatin,DDP）分别处理A549及细胞球48 h,用MTT检测48 h内细胞的存活率。应用比色法检测10、50、100、200μmol/L EA对A549细胞球中谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase,GST）活性的抑制作用。应用流式细胞术、Western blot、Real-timePCR、相差显微镜观察检测200μmol/L EA处理A549细胞球前后ROS水平、细胞成球能力、β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白以及β-catenin启动子活性的变化情况。应用β-catenin腺病毒感染A549细胞球后,再用200μmol/L EA的处理A549细胞球,利用Real-time PCR和Western blot检测β-catenin S、Sox2... 

【文章来源】：第三军医大学学报. 2017,39(17)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

相差显微镜观察A549细胞克隆及A549细胞球

胞球(图1)。A549细胞球中CD133、EpCAM、SOX2以及ABCG2的表达水平较A549细胞显著升高(图2)。用不同浓度的DDP分别处理A549细胞球和A549细胞，随着浓度的增加，与A549细胞的细胞活力0h比较，显著下调(P＜0.05)，而A549细胞球的细胞活力无显著变化(P＞0.05，图3)。此外，基于我们的前期研究［4－5］，后续实验我们将使用5mg/mL的DDP处理A549细胞球。A:A549细胞形成的克隆蓝色箭头为紧密型克隆，绿色箭头为疏松型克隆;B:A549细胞球图1相差显微镜观察A549细胞克隆及A549细胞球变化(×200)1:A549细胞球;2:A549细胞图2Westernblot检测A549细胞球和A549细胞中干细胞标志物CD133、EpCAM、SOX2以及ABCG2的表达水平2．2EA对A549细胞球中GST活性和ＲOS水平的影响随着EA浓度从10μmol/L到200μmol/L逐渐升高，A549细胞球中GST的活性逐渐降低(图4，P＜0.05)。由于200μmol/LEA处理使GST活性降至最低，因此后续实验EA均使用200μmol/L的浓度对A549细胞球进行处理。我们用200μmol/LEA处理A549细胞球48h后用流式细胞仪检测ＲOS水平(图5)，EA处理组(240．0±3．6)，对照组(142．7±2.4)。EA处理组较对照组的ＲOS水平显著升高(P＜0.01)。上述结果说明EA可以特异性抑制GST的活性，并上调ＲOS水平。a:P＜0.05，与DDP处理0h比较图3CCK-8检测不同浓度DDP分别处理A549细胞球和A549细胞48h后细胞存活率变化1:对照组，2:10μmol/LEA组，3:50μmol/LEA组，4:100μmol/LEA组，5:200μmol/LEA组a:P＜0.05，与对照组比较;b:P＜0.05，与10μmol/LEA组比较;c:P＜0.05，与50μmol/LEA组比较;d:P＜0.05，与100μmol/LEA组比较图4不同浓度EA处理A549细胞球48h后GST活性的变化图5流式细胞术检测200μmol/LEA处理A549细胞球48h后DCFH的荧光强度(?

锼??2．2EA对A549细胞球中GST活性和ＲOS水平的影响随着EA浓度从10μmol/L到200μmol/L逐渐升高，A549细胞球中GST的活性逐渐降低(图4，P＜0.05)。由于200μmol/LEA处理使GST活性降至最低，因此后续实验EA均使用200μmol/L的浓度对A549细胞球进行处理。我们用200μmol/LEA处理A549细胞球48h后用流式细胞仪检测ＲOS水平(图5)，EA处理组(240．0±3．6)，对照组(142．7±2.4)。EA处理组较对照组的ＲOS水平显著升高(P＜0.01)。上述结果说明EA可以特异性抑制GST的活性，并上调ＲOS水平。a:P＜0.05，与DDP处理0h比较图3CCK-8检测不同浓度DDP分别处理A549细胞球和A549细胞48h后细胞存活率变化1:对照组，2:10μmol/LEA组，3:50μmol/LEA组，4:100μmol/LEA组，5:200μmol/LEA组a:P＜0.05，与对照组比较;b:P＜0.05，与10μmol/LEA组比较;c:P＜0.05，与50μmol/LEA组比较;d:P＜0.05，与100μmol/LEA组比较图4不同浓度EA处理A549细胞球48h后GST活性的变化图5流式细胞术检测200μmol/LEA处理A549细胞球48h后DCFH的荧光强度(胞内ＲOS水平)http://aammt．tmmu．edu．cn第三军医大学学报，2017，39(17)1723

【参考文献】：
期刊论文
[1]Beyond tumorigenesis: cancer stem cells in metastasis[J]. Benjamin Tiede,JoanMassagué.  Cell Research. 2007(01)



本文编号：3596767