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STIM1在胃癌中的表达及功能研究

发布时间:2022-01-23 14:51
  STIM1是一种内质网膜上的跨膜蛋白,它能调节细胞内钙离子浓度,维持钙离子稳态。细胞内钙离子通过不同信号通路在多个环节影响着肿瘤的分化、增殖、凋亡、迁移等STIM1是细胞内关键的钙离子感受器,它与肿瘤的关系受到广泛关注。文献报道,STIM1在多种肿瘤细胞中表达,如乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌等。目前,尚未见STIM1与胃癌有关的报道,且关于STIM1对肿瘤细胞生物学行为影响的观点存在较大分歧。目的本课题以胃癌为研究对象,探究STIM1在胃癌中的表达,STIM1对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响,并初步探讨其机制。方法(1)Western Blot检测MKN45、SGC7901、AGS、NCI-N87四种胃癌细胞株中STIM1表达情况。(2)si RNA干扰下调胃癌细胞中STIM1表达,Western Blot与实时荧光定量PCR检测干扰效率。(3)CCK8检测细胞增殖。(4)Annexin V-FITC/PI双染流式检测细胞凋亡。(5)细胞粘附实验、Transwell和细胞划痕实验检测STIM1对胃癌细胞粘附、迁移、侵袭能力的影响。(6)Western Blot检测STIM1功能... 

【文章来源】:成都医学院四川省

【文章页数】:68 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

STIM1在胃癌中的表达及功能研究


WesternBlot检测四种胃癌细胞中STIM1的表达情况

干扰效率,转染,黄色物质


图 3-2 STIM1-siRNA 转染后的干扰效率Figure 3-2 The interference efficiency of STIM1-siRNA Transfection注:A 图表示 Wesrern Blot 检测 MKN45 细胞中 STIM1 分子干扰效率;B 图表示为三组细胞中STIM1 蛋白相对含量;C 图为荧光定量 PCR 检测三组细胞中 STIM1-mRNA 相对含量。所有数值均由 x s表示(n=3),*表示与 Control siRNA 相比 P < 0.05, **表示与 Control siRNA相比 P < 0.01 。3.1.3 STIM1 对胃癌细胞增殖无影响CCK8 可与活细胞反应生成可溶的黄色物质,活细胞的数目与此黄色物质的数量成正比,黄色物质在波长430-490nm下有最大吸光值。因此,使用酶标仪在450nM波长处测定此溶液的 OD 值可反映溶液中活细胞数量。本实验将 SGC7901、MKN45两种细胞分别分为 Wildtype、Control siRNA、STIM1 siRNA 三组,STIM1 siRNA组转染 STIM1 特异性 siRNA,Control siRNA 组转染阴性对照 siRNA。用 CCK8试剂盒检测两种细胞转染后 12 小时、24 小时、48 小时后细胞细胞数目。由图 3-3

胃癌细胞株,黄色物质


注:A 图表示 Wesrern Blot 检测 MKN45 细胞中 STIM1 分子干扰效率;B 图表示为三组细胞中STIM1 蛋白相对含量;C 图为荧光定量 PCR 检测三组细胞中 STIM1-mRNA 相对含量。所有数值均由 x s表示(n=3),*表示与 Control siRNA 相比 P < 0.05, **表示与 Control siRNA相比 P < 0.01 。3.1.3 STIM1 对胃癌细胞增殖无影响CCK8 可与活细胞反应生成可溶的黄色物质,活细胞的数目与此黄色物质的数量成正比,黄色物质在波长430-490nm下有最大吸光值。因此,使用酶标仪在450nM波长处测定此溶液的 OD 值可反映溶液中活细胞数量。本实验将 SGC7901、MKN45两种细胞分别分为 Wildtype、Control siRNA、STIM1 siRNA 三组,STIM1 siRNA组转染 STIM1 特异性 siRNA,Control siRNA 组转染阴性对照 siRNA。用 CCK8试剂盒检测两种细胞转染后 12 小时、24 小时、48 小时后细胞细胞数目。由图 3-3可以看出在 SGC7901 和 MKN45 干扰 12 小时、24 小时、48 小时后干扰组细胞 OD值与对照组差别无统计学意义。

【参考文献】:
期刊论文
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博士论文
[1]STIM1/SOC细胞内调节机制在血管平滑肌细胞增殖中的作用研究[D]. 郭瑞威.第三军医大学 2009

硕士论文
[1]STIM1/Orai1信号对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响[D]. 王丹.福建医科大学 2014



本文编号:3604578

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