STIM1在胃癌中的表达及功能研究
发布时间：2022-01-23 14:51
STIM1是一种内质网膜上的跨膜蛋白,它能调节细胞内钙离子浓度,维持钙离子稳态。细胞内钙离子通过不同信号通路在多个环节影响着肿瘤的分化、增殖、凋亡、迁移等STIM1是细胞内关键的钙离子感受器,它与肿瘤的关系受到广泛关注。文献报道,STIM1在多种肿瘤细胞中表达,如乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌等。目前,尚未见STIM1与胃癌有关的报道,且关于STIM1对肿瘤细胞生物学行为影响的观点存在较大分歧。目的本课题以胃癌为研究对象,探究STIM1在胃癌中的表达,STIM1对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响,并初步探讨其机制。方法（1）Western Blot检测MKN45、SGC7901、AGS、NCI-N87四种胃癌细胞株中STIM1表达情况。（2）si RNA干扰下调胃癌细胞中STIM1表达,Western Blot与实时荧光定量PCR检测干扰效率。（3）CCK8检测细胞增殖。（4）Annexin V-FITC/PI双染流式检测细胞凋亡。（5）细胞粘附实验、Transwell和细胞划痕实验检测STIM1对胃癌细胞粘附、迁移、侵袭能力的影响。（6）Western Blot检测STIM1功能...
【文章来源】：成都医学院四川省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
WesternBlot检测四种胃癌细胞中STIM1的表达情况
图 3-2 STIM1-siRNA 转染后的干扰效率Figure 3-2 The interference efficiency of STIM1-siRNA Transfection注：A 图表示 Wesrern Blot 检测 MKN45 细胞中 STIM1 分子干扰效率；B 图表示为三组细胞中STIM1 蛋白相对含量；C 图为荧光定量 PCR 检测三组细胞中 STIM1-mRNA 相对含量。所有数值均由 x s表示（n=3），*表示与 Control siRNA 相比 P < 0.05, **表示与 Control siRNA相比 P < 0.01 。3.1.3 STIM1 对胃癌细胞增殖无影响CCK8 可与活细胞反应生成可溶的黄色物质，活细胞的数目与此黄色物质的数量成正比，黄色物质在波长430-490nm下有最大吸光值。因此，使用酶标仪在450nM波长处测定此溶液的 OD 值可反映溶液中活细胞数量。本实验将 SGC7901、MKN45两种细胞分别分为 Wildtype、Control siRNA、STIM1 siRNA 三组，STIM1 siRNA组转染 STIM1 特异性 siRNA，Control siRNA 组转染阴性对照 siRNA。用 CCK8试剂盒检测两种细胞转染后 12 小时、24 小时、48 小时后细胞细胞数目。由图 3-3
注：A 图表示 Wesrern Blot 检测 MKN45 细胞中 STIM1 分子干扰效率；B 图表示为三组细胞中STIM1 蛋白相对含量；C 图为荧光定量 PCR 检测三组细胞中 STIM1-mRNA 相对含量。所有数值均由 x s表示（n=3），*表示与 Control siRNA 相比 P < 0.05, **表示与 Control siRNA相比 P < 0.01 。3.1.3 STIM1 对胃癌细胞增殖无影响CCK8 可与活细胞反应生成可溶的黄色物质，活细胞的数目与此黄色物质的数量成正比，黄色物质在波长430-490nm下有最大吸光值。因此，使用酶标仪在450nM波长处测定此溶液的 OD 值可反映溶液中活细胞数量。本实验将 SGC7901、MKN45两种细胞分别分为 Wildtype、Control siRNA、STIM1 siRNA 三组，STIM1 siRNA组转染 STIM1 特异性 siRNA，Control siRNA 组转染阴性对照 siRNA。用 CCK8试剂盒检测两种细胞转染后 12 小时、24 小时、48 小时后细胞细胞数目。由图 3-3可以看出在 SGC7901 和 MKN45 干扰 12 小时、24 小时、48 小时后干扰组细胞 OD值与对照组差别无统计学意义。
【参考文献】：
期刊论文
[1]早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见[J]. 中国肿瘤临床与康复. 2014(10)
[2]我国胃癌防治研究三十年回顾[J]. 季加孚. 中国肿瘤临床. 2013(22)
[3]癌细胞中钙离子通道的研究进展[J]. 何建林,郑仕中,陆茵,徐长安,唐旭,易瑞灶. 中国药理学通报. 2012(07)
[4]Carcinoma of the stomach: A review of epidemiology, pathogenesis, molecular genetics and chemoprevention[J]. Siddavaram Nagini. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2012(07)
[5]Orai1和STIM1在衰老大鼠平滑肌细胞中的变化及对血管收缩的调节作用[J]. 朱金行,祝延,柯道平,沈兵,杜鹃. 安徽医科大学学报. 2012(02)
[6]RNA干扰沉默STIM1表达对低氧下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响[J]. 后显华,陈建,罗勇军,刘福玉,杨晓红,袁志兵,徐刚,陈德伟,高钰琪. 第三军医大学学报. 2011(05)
[7]免疫组织化学反应结果的判断标准[J]. 许良中,杨文涛. 中国癌症杂志. 1996(04)
博士论文
[1]STIM1/SOC细胞内调节机制在血管平滑肌细胞增殖中的作用研究[D]. 郭瑞威.第三军医大学 2009
硕士论文
[1]STIM1/Orai1信号对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响[D]. 王丹.福建医科大学 2014
本文编号：3604578
【文章来源】：成都医学院四川省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
WesternBlot检测四种胃癌细胞中STIM1的表达情况
图 3-2 STIM1-siRNA 转染后的干扰效率Figure 3-2 The interference efficiency of STIM1-siRNA Transfection注：A 图表示 Wesrern Blot 检测 MKN45 细胞中 STIM1 分子干扰效率；B 图表示为三组细胞中STIM1 蛋白相对含量；C 图为荧光定量 PCR 检测三组细胞中 STIM1-mRNA 相对含量。所有数值均由 x s表示（n=3），*表示与 Control siRNA 相比 P < 0.05, **表示与 Control siRNA相比 P < 0.01 。3.1.3 STIM1 对胃癌细胞增殖无影响CCK8 可与活细胞反应生成可溶的黄色物质，活细胞的数目与此黄色物质的数量成正比，黄色物质在波长430-490nm下有最大吸光值。因此，使用酶标仪在450nM波长处测定此溶液的 OD 值可反映溶液中活细胞数量。本实验将 SGC7901、MKN45两种细胞分别分为 Wildtype、Control siRNA、STIM1 siRNA 三组，STIM1 siRNA组转染 STIM1 特异性 siRNA，Control siRNA 组转染阴性对照 siRNA。用 CCK8试剂盒检测两种细胞转染后 12 小时、24 小时、48 小时后细胞细胞数目。由图 3-3
注：A 图表示 Wesrern Blot 检测 MKN45 细胞中 STIM1 分子干扰效率；B 图表示为三组细胞中STIM1 蛋白相对含量；C 图为荧光定量 PCR 检测三组细胞中 STIM1-mRNA 相对含量。所有数值均由 x s表示（n=3），*表示与 Control siRNA 相比 P < 0.05, **表示与 Control siRNA相比 P < 0.01 。3.1.3 STIM1 对胃癌细胞增殖无影响CCK8 可与活细胞反应生成可溶的黄色物质，活细胞的数目与此黄色物质的数量成正比，黄色物质在波长430-490nm下有最大吸光值。因此，使用酶标仪在450nM波长处测定此溶液的 OD 值可反映溶液中活细胞数量。本实验将 SGC7901、MKN45两种细胞分别分为 Wildtype、Control siRNA、STIM1 siRNA 三组，STIM1 siRNA组转染 STIM1 特异性 siRNA，Control siRNA 组转染阴性对照 siRNA。用 CCK8试剂盒检测两种细胞转染后 12 小时、24 小时、48 小时后细胞细胞数目。由图 3-3可以看出在 SGC7901 和 MKN45 干扰 12 小时、24 小时、48 小时后干扰组细胞 OD值与对照组差别无统计学意义。
【参考文献】：
期刊论文
[1]早期胃癌筛查及内镜诊治共识意见[J]. 中国肿瘤临床与康复. 2014(10)
[2]我国胃癌防治研究三十年回顾[J]. 季加孚. 中国肿瘤临床. 2013(22)
[3]癌细胞中钙离子通道的研究进展[J]. 何建林,郑仕中,陆茵,徐长安,唐旭,易瑞灶. 中国药理学通报. 2012(07)
[4]Carcinoma of the stomach: A review of epidemiology, pathogenesis, molecular genetics and chemoprevention[J]. Siddavaram Nagini. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2012(07)
[5]Orai1和STIM1在衰老大鼠平滑肌细胞中的变化及对血管收缩的调节作用[J]. 朱金行,祝延,柯道平,沈兵,杜鹃. 安徽医科大学学报. 2012(02)
[6]RNA干扰沉默STIM1表达对低氧下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响[J]. 后显华,陈建,罗勇军,刘福玉,杨晓红,袁志兵,徐刚,陈德伟,高钰琪. 第三军医大学学报. 2011(05)
[7]免疫组织化学反应结果的判断标准[J]. 许良中,杨文涛. 中国癌症杂志. 1996(04)
博士论文
[1]STIM1/SOC细胞内调节机制在血管平滑肌细胞增殖中的作用研究[D]. 郭瑞威.第三军医大学 2009
硕士论文
[1]STIM1/Orai1信号对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响[D]. 王丹.福建医科大学 2014
本文编号：3604578
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