靶向沉默VDR对PC-3细胞迁移能力和侵袭性的影响及对GLi1的作用

发布时间：2022-01-26 18:02

　　[目的]研究维生素D受体（VDR）在PC-3细胞（前列腺癌细胞株）中的表达及其意义和通过短发夹RNA（short hairpin RNA,s RNA）沉默靶基因的方式来探究VDR基因对PC-3细胞迁移能力和侵袭性的影响,并且探讨VDR与脑胶质瘤相关癌基因1（GLi1）相关性。[方法]1、依照PC-3细胞培养条件培养细胞;采用荧光定量PCR法在mRNA水平检测PC-3细胞中VDR基因表达和转录水平;2、通过细胞免疫荧光法在蛋白水平检测PC-3细胞中VDR蛋白表达;3、质粒和慢病毒包装由上海生工生物工程股份有限公司设计并合成,选用针对VDR基因干扰效率最佳的 VDR-homo-433:5’GGAGTTCATTCTGACAGATGA3’作为干扰序列;4、把PC-3细胞分成空白对照组,阴性对照组和实验组三组,培养液中不加入维生素D及维生素D类似物。构建VDR-shRNA（+）慢病毒载体侵染实验组,VDR-shRNA（-）慢病毒组侵染阴性对照组,空白对照组不做处理,利用RT-PCR和Western Blot法分别在mRNA和蛋白水平检测以上三细胞组VDR转录和表达情况;5、通过细胞划痕愈合实验和... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．电泳结果??

图１细胞培养图片（１００Ｘ）??；ＢＰＣ－３细胞传代后Ｉｄ；?ＣＰＣ－３细胞传胞传代后３ｄ；?Ｅ?ＰＣ－３细胞传代后４ｄ??Ａ电泳结果??ＲＮＡ进行电泳纯度检测（１．５％琼脂糖，ＩＸＲＮＡ电泳２８ｓ?ｒＲＮＡ、１８ｓ?ｒＲＮＡ两条带清带，各组细胞提取的总ＲＮＡ没有明显污染ｒｋｅｒ，其只为检测基因组污染，并不代表Ｒ

１．１．２?ＰＣＲ产物电泳??把各组提取的样本在１．５％琼脂糖（１５０Ｖ、１００ｍＡ２０ｍｉｎ）电泳下观察，见??图３，?ＰＣ－３细胞和阳性对照组细胞ＨＫ－２细胞均发现ＶＤＲ基因转录ｍＲＮＡ，而??且转录水平差异不明显。??１４??

【参考文献】：
期刊论文
[1]小干扰RNA沉默HK-2细胞VDR及其对低枸橼酸尿症的意义[J]. 李康健,罗钰辉,莫茵,申吉泓,刘孝东,李颢.  昆明医科大学学报. 2017(10)
[2]Loss of the vitamin D receptor in human breast and prostate cancers strongly induces cell apoptosis through downregulation of Wnt/β-catenin signaling[J]. Yu Zheng,Trupti Trivedi,Ruby CY Lin,Colette Fong-Yee,Rick Nolte,Jeline Manibo,Yunzhao Chen,Musharraf Hossain,Konstantin Horas,Colin Dunstan,Hong Zhou,Markus J Seibel.  Bone Research. 2017(03)
[3]维生素D受体和P-糖蛋白在胃癌组织中的表达及意义[J]. 房栋,李成军,胡萍萍,陈淼.  疑难病杂志. 2016(10)
[4]VDR和NaDC1在HK-2细胞中的表达及其对低枸橼酸尿症的意义[J]. 李康健,莫茵,申吉泓,罗钰辉,刘孝东,李颢.  昆明医科大学学报. 2016(01)
[5]Gli-1 siRNA对PANC-1增殖及凋亡的影响[J]. 王伟,张炳太,李茂岚,林镇海.  中国医疗前沿. 2010(23)



本文编号：3610933