ACSS2通过PI3K/AKT信号通路参与食管鳞癌细胞的顺铂敏感性调控
发布时间：2022-02-08 22:59
【目的】探讨乙酰辅酶A合成酶2（acetyl-CoA synthetase 2,ACSS2）表达改变对食管鳞癌细顺铂（cisplatin,DDP）敏感性的影响和相关机制。【方法】（1）通过免疫组化和蛋白质印迹法检测40对食管鳞癌瘤体及癌旁组织中ACSS2的表达水平;蛋白质印迹法验证食管鳞癌细胞株与食管鳞状正常Het-1A细胞中ACSS2表达差异;（2）利用脂质体转染siRNA-ACSS2、阴性对照siRNA-NC或者慢病毒转染LV-ACSS2至TE-1细胞构建ACSS2下调或过表达细胞株;CCK8实验检测下调ACSS2对顺铂IC50值的改变;（3）顺铂处理（5μg/mL）前后,流式细胞术检测ACSS2干扰处理对TE-1细胞凋亡水平的影响;（4）蛋白质印迹检测PI3K/AKT信号通路及凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3的表达变化。【结果】（1）免疫组化结果显免疫组化及蛋白质印迹结果显示食管鳞癌组织中ACSS2蛋白表达强度要显著高于癌旁正常组织（P<0.001）;食管鳞癌细胞株中ACSS2表达水平要明显高于正常鳞状上皮细胞Het-1A;（2）CCK8结果显示siRNA-A...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
食管鳞癌和正常组织中ACSS2表达水平Fig1.1TheexpressionlevelsofACSS2inESCCtumorsandadjacentnormaltissues.
ACSS2通过PI3K/AKT信号通路参与食管鳞癌细胞的顺铂敏感性调控18表1.1组织样本中ACSS2总分分级Table1.TheexpressionlevelsofACSS2intissuesamples.食管鳞癌组织癌旁正常组织合计-+++-1001+106420++59519合计16159401.3.2食管鳞癌细胞及正常人食管鳞状上皮细胞中ACSS2表达水平通过qRT-PCR和Westernblot分析检测了不同食管鳞癌细胞系当中以及正常人食管鳞状上皮细胞ACSS2的表达水平（图12）。通过与正常人食管鳞状上皮细胞(Het-1A)细胞对比发现，食管鳞癌细胞TE-1、ECA-109及KYSE-150均有较强的ACSS2表达，并且在三株食管鳞癌细胞系当中，ACSS2在TE-1细胞系当中表达最为显著。在接下来的功能实验当中我们选取ACSS2表达较强的TE-1细胞作为主要研究对象。图1.2荧光定量PCR及免疫印迹实验检测食管鳞癌细胞及正常人食管鳞状上皮细胞中ACSS2表达强度Fig1.2DetectACSS2expressionintensityinesophagealsquamouscellcarcinomacellsandnormalesophagealsquamouscellcellsbyRT-PCRandWB注：*P<0.05，**P<0.01
江苏大学硕士学位论文27沿着每孔的孔壁缓慢加入，加样完成后放回培养箱，继续等待2h；（7）关闭灯光拉上窗帘，将96孔板卡在酶标仪工作区中，打开电脑软件，设置波长为450nm测定每孔的OD值，按公式计算出生长活力值及IC50值。收集数据，软件分析绘图。2.2.6统计学分析同第一章2.3结果2.3.1食管鳞癌细胞中不同siRNA-ACSS2转染效果比较为了进一步探究食管鳞癌细胞中异常活化表达的ACSS2是否在食管癌化疗敏感性调控中发挥作用，首先通过Westernblot法对3组siRNA干扰效果进行对比，发现其中siRNA-ACSS2-#3效果最好，siRNA-ACSS2-#1和#2的效果较为一致且均弱于#3（图21）。我们选取干扰效果较好#3和次之的#1进行下一步实验。图2.1不同siRNA-ACSS2处理效果Fig2.1DifferentsiRNA-ACSS2TreatmentEffects2.3.2ACSS2下调对食管鳞癌细胞中顺铂IC50值的影响对TE-1细胞分别干扰ACSS2或者NC处理后采用梯度浓度的DDP处理24h后证实，相同浓度的DDP条件下除12.5μg/mL浓度以外，siRNA-ACSS2-#3处理组的食管鳞癌细胞活力在除12.5μg/mL浓度以外下降幅度较对照组、阴性对照组均有显著差异，具有统计学意义（25、50μg/mL，p<0.05；3.125、6.25μg/mL，p<0.001）；siRNA-ACSS2-#1处理组的食管鳞癌细胞活力在50、25、
【参考文献】：
期刊论文
[1]CCGD-ESCC: A Comprehensive Database for Genetic Variants Associated with Esophageal Squamous Cell Carcinoma in Chinese Population[J]. Linna Peng,Sijin Cheng,Yuan Lin,Qionghua Cui,Yingying Luo,Jiahui Chu,Mingming Shao,Wenyi Fan,Yamei Chen,Ai Lin,Yiyi Xi,Yanxia Sun,Lei Zhang,Chao Zhang,Wen Tan,Ge Gao,Chen Wu,Dongxin Lin. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2018(04)
[2]江苏省扬中市1991～2012年食管癌流行趋势分析[J]. 仝海员,华召来. 中国肿瘤. 2017(02)
[3]2002-2013年扬中市居民恶性肿瘤死亡情况分析[J]. 仝海员. 江苏预防医学. 2016(02)
本文编号：3615912
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
食管鳞癌和正常组织中ACSS2表达水平Fig1.1TheexpressionlevelsofACSS2inESCCtumorsandadjacentnormaltissues.
ACSS2通过PI3K/AKT信号通路参与食管鳞癌细胞的顺铂敏感性调控18表1.1组织样本中ACSS2总分分级Table1.TheexpressionlevelsofACSS2intissuesamples.食管鳞癌组织癌旁正常组织合计-+++-1001+106420++59519合计16159401.3.2食管鳞癌细胞及正常人食管鳞状上皮细胞中ACSS2表达水平通过qRT-PCR和Westernblot分析检测了不同食管鳞癌细胞系当中以及正常人食管鳞状上皮细胞ACSS2的表达水平（图12）。通过与正常人食管鳞状上皮细胞(Het-1A)细胞对比发现，食管鳞癌细胞TE-1、ECA-109及KYSE-150均有较强的ACSS2表达，并且在三株食管鳞癌细胞系当中，ACSS2在TE-1细胞系当中表达最为显著。在接下来的功能实验当中我们选取ACSS2表达较强的TE-1细胞作为主要研究对象。图1.2荧光定量PCR及免疫印迹实验检测食管鳞癌细胞及正常人食管鳞状上皮细胞中ACSS2表达强度Fig1.2DetectACSS2expressionintensityinesophagealsquamouscellcarcinomacellsandnormalesophagealsquamouscellcellsbyRT-PCRandWB注：*P<0.05，**P<0.01
江苏大学硕士学位论文27沿着每孔的孔壁缓慢加入，加样完成后放回培养箱，继续等待2h；（7）关闭灯光拉上窗帘，将96孔板卡在酶标仪工作区中，打开电脑软件，设置波长为450nm测定每孔的OD值，按公式计算出生长活力值及IC50值。收集数据，软件分析绘图。2.2.6统计学分析同第一章2.3结果2.3.1食管鳞癌细胞中不同siRNA-ACSS2转染效果比较为了进一步探究食管鳞癌细胞中异常活化表达的ACSS2是否在食管癌化疗敏感性调控中发挥作用，首先通过Westernblot法对3组siRNA干扰效果进行对比，发现其中siRNA-ACSS2-#3效果最好，siRNA-ACSS2-#1和#2的效果较为一致且均弱于#3（图21）。我们选取干扰效果较好#3和次之的#1进行下一步实验。图2.1不同siRNA-ACSS2处理效果Fig2.1DifferentsiRNA-ACSS2TreatmentEffects2.3.2ACSS2下调对食管鳞癌细胞中顺铂IC50值的影响对TE-1细胞分别干扰ACSS2或者NC处理后采用梯度浓度的DDP处理24h后证实，相同浓度的DDP条件下除12.5μg/mL浓度以外，siRNA-ACSS2-#3处理组的食管鳞癌细胞活力在除12.5μg/mL浓度以外下降幅度较对照组、阴性对照组均有显著差异，具有统计学意义（25、50μg/mL，p<0.05；3.125、6.25μg/mL，p<0.001）；siRNA-ACSS2-#1处理组的食管鳞癌细胞活力在50、25、
【参考文献】：
期刊论文
[1]CCGD-ESCC: A Comprehensive Database for Genetic Variants Associated with Esophageal Squamous Cell Carcinoma in Chinese Population[J]. Linna Peng,Sijin Cheng,Yuan Lin,Qionghua Cui,Yingying Luo,Jiahui Chu,Mingming Shao,Wenyi Fan,Yamei Chen,Ai Lin,Yiyi Xi,Yanxia Sun,Lei Zhang,Chao Zhang,Wen Tan,Ge Gao,Chen Wu,Dongxin Lin. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2018(04)
[2]江苏省扬中市1991～2012年食管癌流行趋势分析[J]. 仝海员,华召来. 中国肿瘤. 2017(02)
[3]2002-2013年扬中市居民恶性肿瘤死亡情况分析[J]. 仝海员. 江苏预防医学. 2016(02)
本文编号：3615912
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