长链非编码RNA-linc00645对肾透明细胞癌细胞增殖和迁移的影响
发布时间：2022-02-14 14:23
研究背景肾细胞癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,每年在全球范围内约造成10万人死亡,分别占男女恶性肿瘤的5%和3%。肾细胞癌是起源于肾实质泌尿小管上皮细胞的一种恶性肿瘤,可分为多种细胞亚型,其中肾透明细胞癌是最为常见的病理类型。尚无针对肾癌的简便、经济的筛查手段;目前肾癌的术前诊断主要依靠影像学检查,但影像学检查有时难以确定肾脏肿瘤的良恶性;确诊主要依靠术后组织病理学检查。肾癌的治疗仍以肾根治性切除术、肾部分切除术等微创手术为主;术后缺乏经济有效的辅助治疗手段。虽然细胞因子治疗已应用于临床数年,但因其副作用大、有效率低,有时难以取得满意的疗效。大约有40%的肾癌患者术后出现肿瘤的复发及转移,且转移性肾癌患者的预后很差,五年生存率只有10%左右。虽然目前已有针对转移性肾癌的靶向治疗药物,能将患者的总生存时间提高数月;但其费用高昂,长时间应用还存在耐受性差、耐药性强的问题。因此迫切需要研究新的分子生物靶点来指导早期诊断和后续治疗。长链非编码RNA（lncRNA）是长度超过200个核苷酸且不能编码蛋白质的一类RNA。既往被认为是转录噪音。近年来随着二代测序技术的普及和相关研究技术的成熟应用,l...
【文章来源】：郑州大学河南省211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．２?Ｉｉｎｃ００６４５在肾透明细胞癌组织中的相对表达??
????３．３?Ｌｉｎｃ００６４５抑制肾透明细胞癌细胞增殖??为了验证ｌｉｎｃ００６４５在体外条件下对细胞增殖的影响，我们进行了?ＣＣＫ－８实??验，验证其对肾癌细胞系７８６－０和ＡＣＨＮ两种细胞增殖的影响。构建ｌｉｎｃ００６４５??过表达质粒并通过脂质体转染法转染至细胞内，培养４８小时后提取总ＲＮＡ，使??用去基因组ＤＮＡ试剂后进行反转录实时荧光定量ＰＣＲ检测，可见构建的过表??达质粒组细胞中ｌｉｎｃ００６４５的表达量远高于空载质粒组（图３．４?Ａ、图３．４?Ｂ，ｐ??＜０．０５）。于转染两天后进行ＣＣＫ－８实验。在％小时的连续细胞培养过程中，??分别在０小时、２４小时、４８小时、７２小时、９６小时将ＣＣＫ－８试剂加入到９６孔??板中相应细胞分组内，并测定吸光度（ＯＤ值）。两个细胞系的ＣＣＫ－８实验表明，??相比于空载质粒组，转染有ｌｉｎｃ００６４５过表达质粒的细胞其增殖受到了明显抑制??（图?３．４Ｃ、图?３．４Ｄ，ｐ＜０．０５）??Ａ?Ｂ??７８６－０细胞过表达效率?ＡＣＨＮ细胞过表达效率??１５〇１?＊＊?５００１??＊＾１１?，??￣￣?＾１?丁??一＂￣?４００－??１００－??域?Ｂ３００＇??Ｓ?ｇ２〇ｏ－??５０??１００－??Ｊ?Ｊ??空载质粒组?ｌｉｎｃ００６４５过表达组?空载质粒组?１?ｉｎｃ００６４５过表达组??Ｃ?７８６－０?ｃｃｋ－８实验?Ｄ?ＡＣＨＮｃｃｋ－８实验??２?５ｉ?２?０－１??．空钗丨贞粒组?？?＋空找质粒绀??〇?ｎ?＋?ｌｉｒｕ．００６１５过衣达约１?＋?Ｉｉｎｃ００６１５过衣达约１??１
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【参考文献】：
期刊论文
[1]长链非编码RNA在肾癌转移中的研究进展[J]. 李海洋,葛余正,贾瑞鹏. 中华实验外科杂志. 2019 (06)
[2]PKM2在肿瘤代谢及进展中的作用[J]. 李玉环,孙国平,李俊. 安徽医科大学学报. 2018(05)
[3]长链非编码RNA与肾癌靶向药物耐药[J]. 曲乐,王安邦,王林辉. 第二军医大学学报. 2017(03)
[4]2016版WHO肾脏肿瘤分类简介[J]. 任庆国,姜慧峰,孟祥水. 国际医学放射学杂志. 2017(02)
[5]长链非编码RNA及其在肾癌中的研究进展[J]. 陈健文,陈亚磊,张瑜,彭程,马鑫. 微创泌尿外科杂志. 2016(06)
[6]肾癌相关长链非编码RNA研究进展[J]. 何安邦,陈浩冬,吕兆洁,阳建庚,梅红兵. 中国癌症杂志. 2016(08)
[7]长链非编码RNA的功能及其作用机制[J]. 李睿,杨永芳,李冉,朱鸿亮,罗云波. 生命科学. 2016(06)
[8]Long Non-coding RNA MEG3 Induces Renal Cell Carcinoma Cells Apoptosis by Activating the Mitochondrial Pathway[J]. 王淼,黄韬,罗刚,黄超,肖行远,汪良,蒋国松,曾甫清. Journal of Huazhong University of Science and Technology（medical Sciences）. 2015(04)
本文编号：3624722
【文章来源】：郑州大学河南省211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．２?Ｉｉｎｃ００６４５在肾透明细胞癌组织中的相对表达??
????３．３?Ｌｉｎｃ００６４５抑制肾透明细胞癌细胞增殖??为了验证ｌｉｎｃ００６４５在体外条件下对细胞增殖的影响，我们进行了?ＣＣＫ－８实??验，验证其对肾癌细胞系７８６－０和ＡＣＨＮ两种细胞增殖的影响。构建ｌｉｎｃ００６４５??过表达质粒并通过脂质体转染法转染至细胞内，培养４８小时后提取总ＲＮＡ，使??用去基因组ＤＮＡ试剂后进行反转录实时荧光定量ＰＣＲ检测，可见构建的过表??达质粒组细胞中ｌｉｎｃ００６４５的表达量远高于空载质粒组（图３．４?Ａ、图３．４?Ｂ，ｐ??＜０．０５）。于转染两天后进行ＣＣＫ－８实验。在％小时的连续细胞培养过程中，??分别在０小时、２４小时、４８小时、７２小时、９６小时将ＣＣＫ－８试剂加入到９６孔??板中相应细胞分组内，并测定吸光度（ＯＤ值）。两个细胞系的ＣＣＫ－８实验表明，??相比于空载质粒组，转染有ｌｉｎｃ００６４５过表达质粒的细胞其增殖受到了明显抑制??（图?３．４Ｃ、图?３．４Ｄ，ｐ＜０．０５）??Ａ?Ｂ??７８６－０细胞过表达效率?ＡＣＨＮ细胞过表达效率??１５〇１?＊＊?５００１??＊＾１１?，??￣￣?＾１?丁??一＂￣?４００－??１００－??域?Ｂ３００＇??Ｓ?ｇ２〇ｏ－??５０??１００－??Ｊ?Ｊ??空载质粒组?ｌｉｎｃ００６４５过表达组?空载质粒组?１?ｉｎｃ００６４５过表达组??Ｃ?７８６－０?ｃｃｋ－８实验?Ｄ?ＡＣＨＮｃｃｋ－８实验??２?５ｉ?２?０－１??．空钗丨贞粒组?？?＋空找质粒绀??〇?ｎ?＋?ｌｉｒｕ．００６１５过衣达约１?＋?Ｉｉｎｃ００６１５过衣达约１??１
????３．４?Ｌｉｎｃ００６４５促进肾透明细胞癌细胞凋亡??随后我们通过Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－Ｐ丨双染色法，用流式细胞仪进行细胞凋亡检测。使??用７８６－０、ＡＣＨＮ两种细胞系分别进行４８小时的过表达质粒转染，收集细胞培??养上清液及贴壁细胞进行流式细胞术。分折两组细胞早期凋亡（Ｑ３象限）及晚??期凋亡（Ｑ２象限）比例之和的差异（图３．５?Ａ、图３．５?Ｃ）。可见７８６－０细胞空载??质粒组的总凋亡细胞比例为１５．４１?±０．３２７?（％），而过ｌｉｎｃ００６４５表达组细胞的总??凋亡比例为２６．５丨土?１．０丨５?（％），可见在ｌｉｎｃ００６４５过表达之后，细胞凋亡比例明??显增加（图３．５Ｂ，?／；＜０．０５）。在ＡＣＨＮ细胞中的相同实验也得到了类似的结果??（图３?Ｄ，?ｐ＜０．０５），空载质粒组的总凋亡细胞比例为９．５７±０．２８３（％），Ｉｉｎｃ００６４５??表达组总凋亡细胞比例为１４．１?±０．３６７?（％）。可见在ｌｉｎｃ００６４５过表达，两种细胞??的凋亡比例明显增加。??Ａ?７８６?０凋广丈验?ｇ??，〇，１＾?１．二?Ａ?，°７?７８６?０凋亡实验???■—Ｉ??―备?▲??？ｖ?０ｒ?＾?＾?Ｕ??ｍ?１０－??，〇？?－０３?－?０４?０３?Ｔ，??〇?Ｊ?６?０８??＿＂？，」?扣。仁…，．”Ｕ?羝??１０?，〇?Ｆ＾ＣＨ?＊°〇?，〇：?＾?０?空較Ｕｎｃ００６４５过农达?ｆｆｌ??ｒｕ－Ｈ?ＦｆＴＣ－Ｈ?＞Ｕ?Ｈ?ＦＩＴＣ－Ｈ??９伐?Ｗｉ?料?ｍ?Ｌｉｎｃ００６４５?过农达?Ｗｉｆｉ?ｍ??ｃ?ＡＣＨＮ糾广丈吣?Ｄ??《
【参考文献】：
期刊论文
[1]长链非编码RNA在肾癌转移中的研究进展[J]. 李海洋,葛余正,贾瑞鹏. 中华实验外科杂志. 2019 (06)
[2]PKM2在肿瘤代谢及进展中的作用[J]. 李玉环,孙国平,李俊. 安徽医科大学学报. 2018(05)
[3]长链非编码RNA与肾癌靶向药物耐药[J]. 曲乐,王安邦,王林辉. 第二军医大学学报. 2017(03)
[4]2016版WHO肾脏肿瘤分类简介[J]. 任庆国,姜慧峰,孟祥水. 国际医学放射学杂志. 2017(02)
[5]长链非编码RNA及其在肾癌中的研究进展[J]. 陈健文,陈亚磊,张瑜,彭程,马鑫. 微创泌尿外科杂志. 2016(06)
[6]肾癌相关长链非编码RNA研究进展[J]. 何安邦,陈浩冬,吕兆洁,阳建庚,梅红兵. 中国癌症杂志. 2016(08)
[7]长链非编码RNA的功能及其作用机制[J]. 李睿,杨永芳,李冉,朱鸿亮,罗云波. 生命科学. 2016(06)
[8]Long Non-coding RNA MEG3 Induces Renal Cell Carcinoma Cells Apoptosis by Activating the Mitochondrial Pathway[J]. 王淼,黄韬,罗刚,黄超,肖行远,汪良,蒋国松,曾甫清. Journal of Huazhong University of Science and Technology（medical Sciences）. 2015(04)
本文编号：3624722
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