1,25（OH）2D3促进阿霉素诱导甲状腺乳头状癌细胞凋亡及其作用机制的研究

发布时间：2022-02-20 09:59

　　目的:甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）是发病率上升最快的实体恶性肿瘤,近十年的发病率以每年5%的速度增长。尽管随着多学科协作诊治模式理念的不断发展,大部分PTC的预后比较好,10年生存率约>90%,然而,对于ⅣB及ⅣC期的PTC患者常出现传统治疗方法难以控制的局部侵袭和远处转移,有些失去手术治疗的机会且对放射性碘治疗不敏感者,预后较差。因此,寻找治疗相关的新靶点,对难治性PTC的治疗具有非常重要的理论和现实意义。中美指南均提及阿霉素（Adriamycin,ADM）可以用于治疗ⅣB及ⅣC期的PTC患者。ADM可通过多种途径发挥抗肿瘤作用,包括抑制DNA拓扑异构酶II、增加细胞内活性氧、激活p53、提高的cyclin G2表达、抑制热休克蛋白等调节肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭。但在ADM的临床应用中发现其副作用较多且伴随剂量依赖性,包括:（1）骨髓抑制,出现严重的感染和出血。（2）心脏毒性,可出现严重的心力衰竭。（3）恶心、呕吐、脱发等。大剂量、高频率的化学治疗所产生的副作用严重损害患者的身心。因此,如何通过降低ADM的毒副作用而不降低其... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：89 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 ：甲状腺乳头状癌血清1,25(OH)2D3水平及磷酸化组织信号转导与转录激活子3与维生素D受体表达情况的研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 研究对象
        2.2 方法
            2.2.1 ELISA法检测外周血血清1,25(OH)2D3浓度
            2.2.2 IHC步骤
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 PTC与对照组血清1,25(OH)2D3浓度比较
        3.2 p-STAT3与VDR在PTC中的表达情况
        3.3 p-STAT3在PTC与癌旁组织中的表达比较
        3.4 PTC组织中p-STAT3与VDR细胞核表达相关性分析
        3.5 血清1,25(OH)2D3水平与PTC临床病理资料的关系
        3.6 p-STAT3表达与PTC临床病理资料的关系
    4 讨论
    5 小结
第二部分 ：1,25(OH)2D3促进阿霉素诱导甲状腺乳头状癌细胞凋亡的实验研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 细胞系
            2.1.2 主要药物及试剂
            2.1.3 实验用引物序列
            2.1.4 主要仪器设备
            2.1.5 细胞培养
            2.1.6 慢病毒感染PTC细胞
        2.2 方法
            2.2.1 CCK-8法检测PTC细胞增殖能力
            2.2.2 流式细胞仪检测PTC细胞凋亡
            2.2.3 PTC细胞总蛋白的提取
            2.2.4 蛋白浓度的测定
            2.2.5 配胶及加样
            2.2.6 电泳
            2.2.7 转膜
            2.2.8 切胶
            2.2.9 抗体孵育
            2.2.10 ECL发光
            2.2.11 PTC细胞RNA的提取
            2.2.12 测量RNA的浓度
            2.2.13 反转录
            2.2.14 Real time PCR
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 ADM对PTC细胞的抑制作用存在浓度依赖性
        3.2 1 ,25(OH)2D3明显增加ADM对PTC细胞的抑制作用
        3.3 1 ,25(OH)2D3明显增加ADM对PTC细胞的凋亡作用
        3.4 1 ,25(OH)2D3明显增加ADM诱导PTC细胞cleaved caspase-3的表达
        3.5 1 ,25(OH)2D3及ADM对PTC细胞p-STAT3表达的影响
        3.6 ADM对PTC细胞内凋亡抑制蛋白表达情况
        3.7 慢病毒过表达p-STAT3后PTC细胞活力及凋亡情况
    4 讨论
    5 小结
第三部分 ：1,25(OH)2D3诱导甲状腺乳头状癌细胞非受体型酪氨酸磷酸酶2表达的机制研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 细胞系
            2.1.2 主要药物及试剂
            2.1.3 实验用引物序列
            2.1.4 实验用到的小干扰RNA序列
            2.1.5 主要仪器设备
            2.1.6 细胞培养
        2.2 方法
            2.2.1 PTC细胞总蛋白的提取
            2.2.2 PTC细胞核蛋白及浆蛋白的提取
            2.2.3 蛋白浓度的测定
            2.2.4 配胶及加样
            2.2.5 电泳
            2.2.6 转膜
            2.2.8 抗体孵育
            2.2.9 ECL发光
            2.2.10 PTC细胞RNA的提取
            2.2.11 测量RNA的浓度
            2.2.13 反转录
            2.2.14 Real time PCR
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 1 ,25(OH)2D3对PTC细胞内p-STAT3负性调节因子表达的情况
        3.2 siRNA干扰PTPN2后1,25(OH)2D3对PTC细胞p-STAT3表达的影响
        3.3 siRNA干扰PTPN2后PTC细胞内p-STAT3表达变化情况
        3.4 1 ,25(OH)2D3促进VDR细胞核内表达增加
        3.5 siRNA干扰VDR后VDR的表达情况
        3.6 siRNA干扰VDR后1,25(OH)2D3对PTC细胞PTPN2、p-STAT3的表达
    4 讨论
    5 小结
结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J]. 陈万青,郑荣寿,张思维,曾红梅,左婷婷,贾漫漫,夏昌发,邹小农,赫捷.  中国肿瘤. 2016(01)



本文编号：3634806